| Electron Tomography to Study the Three-dimensional Structure of Plasmodesmata in Plant Tissues–from High Pressure Freezing Preparation to Ultrathin Section Collection
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Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] Plasmodesmata (PD) are nanometric (~20 nm wide) membrane lined pores encased in the cell walls of the adjacent plant cells. They allow the cells to exchange all types of molecules ranging from nutrients like sugar, hormones, to RNAs and various proteins. Unfortunately, they are also hijacked by phyto-viruses, enabling them to spread from cell-to-cell and then systematically throughout the whole plant. Their central position in plant biology makes it crucial to understand their physiology and especially link their function to their structure. Over the past 50 years, electron microscopists have ...
[摘要] Plasmodesmata（PD）是包裹在相邻植物细胞的细胞壁中的纳米（〜20nm宽）膜衬里的孔。它们允许细胞交换从糖，激素，RNA到各种蛋白质等营养物质的所有类型的分子。不幸的是，它们也被植物病毒劫持，使它们从细胞间传播，然后在整个植物体系中传播。它们在植物生物学中的核心地位使得理解其生理机制，尤其是将其功能与其结构联系起来至关重要。在过去的50年中，电子显微镜观察家们已经观察到了这些现象，并试图用超微结构来表征它们。他们为已知的这些毛孔奠定了基础（Tilney等人，1991; Ding等人，1992; Oparka和Roberts，2001; Nicolas等人， et al。，2017a）。
尽管三维电子显微镜（3D-EM）爆炸，PD超微结构仍然不支持这种技术。第一个技术难点是在尽可能接近原生状态的情况下处理它们。其次，由于染色/固定试剂穿透率差，其体积增大，含水量高以及存在酸性液泡，植物样品显示自己难以加工。最重要的是，它们在细胞壁上的独特位置和它们的纳米尺寸使得难以方便地染色以便看到这些孔隙的内部运作。
这里我们详细描述Nicolas et al。（2017b）中使用的协议，对PD进行细节化处理，并生成高分辨率的X线断层图。
【背景】高压冻结（HPF）依赖于样品中存在的水的玻璃化。通过以足够高的冷冻速度（10 ...
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| Histochemical Preparations to Depict the Structure of Cauliflower Leaf Hydathodes
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] Hydathodes are plant organs present on leaf margins of a wide range of vascular plants and are the sites of guttation. Both anatomy and physiology of hydathodes are poorly documented. We have recently reported on the anatomy of cauliflower and Arabidopsis thaliana hydathodes and on their infection by the vascular pathogenic bacterium Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) (Cerutti et al., 2017). Because hydathodes are natural infection routes for several pathogens, it is necessary to have a deep knowledge of their anatomy to further better ...
[摘要] 水溶性植物是存在于各种维管植物的叶缘上的植物器官，是排列的位置。水解的解剖学和生理学都很少被证明。我们最近报道了花椰菜和拟南芥水解的解剖结构及其血管病原菌黄单胞菌（Xanthomonas campestris）pv的感染。 Cerutti等人，2017）。由于水阴是多种病原体的自然感染途径，因此需要对其解剖学有深入的了解，以进一步更好地解释受感染水合物的图像。在这里，我们描述了不同的详细方案，以获得适用于广泛植物（包括单子叶植物如大麦和水稻）的水溶性解剖学信息。用Nomarsky和共焦显微镜观察澄清的厚样品。透射光和透射电子显微镜中的光学显微镜用于观察薄和超薄切片。
【背景】在文献中，使用不同的技术来研究水溶性（Perrin，1972; Chen and Chen，2007; Wang等人，2011; Singh，2014）。 从光学显微镜（在整个组织或树脂嵌入样品的部分）到扫描或透射电子显微镜，可以使用大型方案和技术。 据我们所知，这些技术并不被组合使用，激光共焦显微镜从未用于描绘水溶性结构。 此外，我们注意到从协议到协议的变化。 我们在这里介绍了组合使用的不同技术。 它们适合花椰菜和拟南芥（Arabidopsis thaliana）。 它们已成功应用于其他植物，如单子叶植物（大麦和大米），应适用于各种植物物种。 ...
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