| Image-Based Analysis of Mitochondrial Area and Counting from Adult Mouse Dopaminergic Neurites
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Mitochondria form dynamic cytoplasmic networks which undergo morphological changes in order to adapt to cellular stresses and signals. These changes can include alterations in size and number within a given cell. Analysis of the whole network can be a useful metric to assess overall mitochondrial health, particularly in neurons, which are highly sensitive to mitochondrial dysfunction. Here we describe a method which combines immunofluorescence and computerized image analysis to measure mitochondrial morphology (quantification of number, density, and area) in dopaminergic neurites of mice ...
[摘要] 线粒体形成动态细胞质网络，其经历形态变化以适应细胞应激和信号。 这些变化可以包括给定单元内的大小和数量的改变。 分析整个网络可以是评估整体线粒体健康的有用指标，特别是在对线粒体功能障碍高度敏感的神经元中。 在这里，我们描述了一种方法，它结合免疫荧光和计算机图像分析，以测量表达线粒体靶向eYFP的小鼠的多巴胺能神经突的线粒体形态（数量，密度和面积的量化）。
【背景】 线粒体是存在于每个复杂生物的基本上所有细胞中的双膜细胞器。它们的主要功能是提供大部分细胞能量作为ATP，但它们也在细胞凋亡，缓冲细胞内Ca 2 + ，活性氧物质产生和膜电位调节中发挥作用（Neupert和Herrmann， 2007; Hamanaka和Chandel，2010; Shutt和McBride，2013）。
这些细胞器通常被描述为单个“豆状”结构，实际上是动态细胞质网络的组成部分。它们可以经历由膜融合和裂变的动态过程调节的主要形态变化，该过程被认为涉及通过称为线粒体自噬的过程消除功能障碍的细胞器。线粒体网络也可以作为对高细胞能量需求的响应而增加（Sheng，2017; Devine和Kittler，2018）。线粒体网络的形态可以根据不同的应激源而改变，并且存在多种可能的形态，即细胞类型，甚至细胞室依赖性（Picard et al。，2013 ...
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| Combinations of Patch-Clamp and Confocal Calcium Imaging in Acutely Isolated Adult Mouse Amygdala Brain Slices
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Calcium imaging is a powerful technique in the study of neuronal physiology, as it avoids the enzyme treatment on neurons and is able to study the neuronal activities in vivo. Using calcium-imaging techniques, we are able to monitor the elevation of calcium in the neuron. Furthermore, we can combine calcium imaging with other methods, like whole-cell patch clamp recordings, to detect a single cell calcium signal in brain slices. In this protocol, we describe a detailed confocal imaging method that is combined with whole-cell patch clamp configuration using brain slices (Du et al. ...
[摘要] 钙成像是神经生理学研究中的一项强有力的技术，因为它避免了对神经元的酶处理，并且能够研究体内的神经元活动。 使用钙成像技术，我们能够监测神经元中钙的升高。 此外，我们可以将钙成像与其他方法结合起来，如全细胞膜片钳记录，以检测脑切片中的单细胞钙信号。 在该协议中，我们描述了一种详细的共焦成像方法，该方法与使用脑切片的全细胞膜片钳配置相结合（Du et al。，2017）。
【背景】几十年来，脑切片已成功用于研究突触，神经元和神经回路。许多实验操作已经应用于脑切片模型，例如药物应用，细胞内记录和光学成像。与培养的神经元相比，脑切片保留了神经元回路的许多基本功能特性。钙成像是一种广泛使用的技术，旨在表明分离的细胞和组织的细胞内钙（Ca 2 + ）状态。研究脑组织中的细胞内钙可以深入了解各种生理过程，如细胞增殖，信号转导，突触可塑性和细胞死亡，因为钙浓度在这些功能中起着关键作用（Cameron et al。，2016）。钙指示剂是一种荧光分子，它与Ca 2 + ...
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| Labeling Aversive Memory Trace in Mouse Using a Doxycycline-inducible Expression System
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] A memory trace, also known as a memory engram, is theorized to be a mechanism for physical memory storage in the brain (Silva et al., 2009; Josselyn, 2010) and memory trace is associated with a specific population of neurons (Liu et al., 2012; Ramirez et al., 2013). Labeling and stimulating those neurons will activate the memory trace (Liu et al., 2012; Ramirez et al., 2013). Memory appears to be spread over different regions of the brain rather than being localized to one area. Therefore, the methods used to trace memory have the ability to ...
[摘要] 存储器跟踪（也称为存储器枚举）被理论化为大脑中物理存储器存储的机制（Silva等人，2009; Josselyn，2010），并且内存跟踪与一个 特定的神经元群体（Liu et al。，2012; Ramirez等人，2013）。 标记和刺激那些神经元将激活记忆痕迹（Liu et al。，2012; Ramirez等人，2013）。 记忆似乎分布在大脑的不同区域，而不是局限于一个区域。 因此，用于跟踪记忆的方法有能力提高我们对神经元电路的理解。 在本协议中，我们引入多西环素诱导表达系统来标记与原始记忆痕迹相关的特定神经元。
【背景】记忆痕迹是记忆被存储为大脑物理或生物化学变化的理论手段（Ryan等人，2015）。在二十世纪初德国动物学家理查德·塞蒙（Richard Semon）制定记忆追踪概念之后，记忆存储的具体过程一直是神经科学领域辩论的一个未解决的话题（Poo et al。，2016）。尽管记忆机制已经成为几十年来的争论焦点，但已经一致认为，特定的神经元被用于记忆的存储（Liu等人，2012; Ramirez等人， ...
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