| Dot Blot Analysis of N6-methyladenosine RNA Modification Levels
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] N6-methyladenosine (m6A) is the most prevalent internal modification of eukaryotic messenger RNA (mRNA). The total amount of m6A can be detected by several methods, such as dot blot analysis using specific m6A antibodies and quantitative liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) (Fu et al., 2014; Shen et al., 2016). Here we describe the method for fast detection of total m6A levels in mRNA by dot blot analysis using a specific m6A antibody.
[摘要] N 6 - 甲基腺苷（m 6）是真核信使RNA（mRNA）的最普遍的内部修饰。可以通过几种方法检测m 6的总量，例如使用特异性m 5抗体的斑点印迹分析和定量液相色谱 - 串联质谱（LC- MS / MS）（Fu等人，2014; Shen等人，2016）。在这里，我们描述使用特异性m 5抗体通过斑点印迹分析来快速检测mRNA中的总m 6 A水平的方法。
背景 与其他方法（如二维薄层色谱和LC-MS / MS）相比，mRNA检测的斑点印迹分析相对容易，快速，经济有效。这种方法可以以定性的方式用于评估在不同发育阶段的各种植物组织或植物中的m A水平的时间和空间变化。这对于通过其他复杂和定量方法进行详细调查之前初步检查相关突变体中m A水平的变化特别有用。
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| Shoot Apical Meristem Size Measurement
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] The shoot apical meristem (SAM) is a collection of cells that continuously renew themselves by cell division and also provide cells to newly developing organs. It has been known that CLAVATA (CLV) 3 peptide regulates a transcription factor WUSCHEL (WUS) to keep numbers of undifferentiated cells constant and maintain the size of the SAM. The interactive feedback control of CLV3 and WUS in a non-cell autonomous signaling cascade determines stem cell fate (maintenance of pluripotency or, alternatively, differentiation into daughter cells) in the SAM. Ca2+ is a secondary messenger that ...
[摘要] 芽顶端分生组织（SAM）是通过细胞分裂不断更新自身的细胞的集合，并且还向新发育的器官提供细胞。已知CLAVATA（CLV）3肽调节转录因子WUSCHEL（WUS）以保持未分化细胞的数量恒定并维持SAM的大小。在非细胞自主信号级联中的CLV3和WUS的交互反馈控制确定SAM中的干细胞命运（多能性的维持，或者，分化成子细胞）。 Ca 2 + 是在许多信号传导途径中起重要作用的第二信使。连接CLV3结合其受体和WUS表达的信号系统没有很好地描绘。我们显示Ca 2 + 参与SAM大小的CLV3调节。我们使用的方法之一是测量SAM的大小。在这里，我们提供了一个详细的协议，如何用Nomarski显微镜测量拟南芥SAM大小。将代表SAM的最大"面"的二维圆顶的面积用作SAM大小的代表。在存在和不存在Ca 2+通道阻断剂Gd 3+和sLV 3肽的情况下对野生型（WT）拟南芥进行研究。 ，以及缺乏功能性CLV3（ clv3 ）或编码Ca 2+ 2+导电离子通道的基因（'dnd1 '）的基因型。 关键字： 拟南芥，射击顶端分生组织，苗发育，细胞信号，幼苗 > Nomarski显微镜广泛用于研究拟南芥SAM大小。用于SAM观察的其他显微技术是耗时的，并且需要将树脂嵌入树脂中，然后切片或甚至更复杂的显微镜。 ...
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| 59Fe Uptake Assays in Paracoccidioides Species
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Author:
Date:
2016-09-20
[Abstract] Iron is an essential micronutrient required for virtually all organisms. This fact is related to the ability of the transition metal to exist in two oxidation states, the reduced ferrous (Fe2+) and the oxidized ferric (Fe3+). Given the relative availability of aqueous iron (the element which constitutes ~5% of the earth’s crust) one is not surprised that iron is the most common prosthetic element in biology. Usually, fungi can uptake iron through receptor-mediated internalization of a siderophore or heme, and/or reductive iron assimilation (RIA) (Kosman, 2013). In this ...
[摘要] 铁是几乎所有生物体所必需的微量营养素。这一事实涉及过渡金属以两种氧化态存在的能力，即还原的亚铁（Fe 2+）和氧化的铁（Fe 3++）。考虑到铁水（构成地壳的〜5％的元素）的相对可用性，人们不惊讶的是，铁是生物学中最常见的假体元素。通常，真菌可以通过受体介导的铁载体或血红素的内化，和/或还原铁同化（RIA）吸收铁（Kosman，2013）。以这种方式，如上所述，可以通过59 Fe吸收测定来研究在还原剂抗坏血酸存在或不存在下铁的吸收（Eide等人）。 ，1992）。在抗坏血酸存在下，研究还原非依赖性59 Fe吸收途径。另一方面，在不存在抗坏血酸的情况下，刺激还原依赖性59 Fe吸收途径。使用这种策略用于人类致病真菌Paracoccidioides物种，结果表明，在没有抗坏血酸的情况下，通过 01的铁摄取是低的，不同于在 > Pb 18。这些结果表明，只有在Fe 18中，铁摄取路径与铁还原酶偶联（Bailão等人，2015）。在该方案中，我们描述了如何在Paracoccidioides物种中进行 59 Fe摄取测定。
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