| Protein Isolation from Plasma Membrane, Digestion and Processing for Strong Cation Exchange Fractionation
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Plasma membrane (PM) proteins play crucial roles in diverse biological processes. But their low abundance, alkalinity and hydrophobicity make their isolation a difficult task. This protocol describes an efficient method for PM proteins isolation, digestion and fractionation so that they can be well prepared for mass spectrometry analysis.
[摘要] 血浆膜（PM）蛋白在不同生物过程中起关键作用。但是，他们的低丰度，碱度和疏水性使其隔离成为一项艰巨的任务。该方案描述了PM蛋白分离，消化和分级的有效方法，以便它们可以很好地准备用于质谱分析。
背景 血浆膜（PM）蛋白参与不同的生物学过程，包括信号转导，离子运输和膜运输，是细胞与环境交流中的第一反应者。它们具有从物种，细胞类型和发育阶段变化的复杂组成（Alexandersson等人，2008）。用质谱（MS）全面揭示其组分和表达特征对发育生物学非常重要。然而，它们的疏水性和低丰度对于蛋白质组学分析是一个很大的挑战（Wu和Yates，2003）。通常使用像正常表面活性剂，有机溶剂和尿素这样的添加剂来改善PM蛋白的溶解度，但它们会降低蛋白酶的活性并在MS分析过程中产生离子抑制（Zhang，2015）。 Rapi Gest SF是一种新型酸不稳定的阴离子表面活性剂，其结构和功能上与SDS类似，但不抑制低浓度（0.1％w / v）下的常见内肽酶活性。因此，Rapi 用于增溶PM蛋白的Gest SF不仅可以通过暴露裂解位点促进它们的消化，而且还容易被强酸淬灭并通过离心去除，使表面活性剂不影响MS鉴定（Yu 等人，2003）。通过Rapi Gest ...
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| Cell Wall-bound p-Coumaric and Ferulic Acid Analysis
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Author:
Date:
2016-10-05
[Abstract] Hydroxycinnamic acids, such as p-coumaric acid and ferulic acid, are a major class of compounds derived from the phenylpropanoid pathway. These compounds are widely conserved in plants and primarily accumulate in the secondary cell wall. They serve as important structural components that contribute to the overall strength and rigidity of plant cell walls and are also potent antioxidants valued for nutritional consumption. This protocol describes a method for analyzing hydroxycinnamic acids that are released after incubation under alkaline conditions.
[摘要] 羟基肉桂酸例如对 - 香豆酸和阿魏酸是衍生自苯丙素途径的一类主要化合物。 这些化合物在植物中广泛保守，并且主要累积在继发性细胞壁中。 它们作为重要的结构组分，有助于植物细胞壁的整体强度和刚性，并且是有价值的营养消耗的有效抗氧化剂。 该方案描述了用于分析在碱性条件下孵育后释放的羟基肉桂酸的方法。
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