| Generating Three-dimensional Human Granulomas in vitro to Study Mycobacterium tuberculosis-host Interaction
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Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] Granulomas are organized multicellular structures that constitute the hallmark of an infection by the human pathogen Mycobacterium tuberculosis (Mtb). A better understanding of the complex host-Mtb interactions within the granuloma’s environment may lead to new therapeutic or preventive tools to improve the control of the tuberculosis pandemic. To date, several in vitro models that are able to mimic human nascent granulomas have been reported. Here we describe a protocol in which Mtb-infected human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are embedded ...
[摘要] [摘要]肉芽肿是有组织的多细胞结构，构成了人类病原体结核分枝杆菌（Mtb ）感染的标志。对肉芽肿环境中复杂的宿主-Mtb相互作用的更好理解可能会导致新的治疗或预防工具，以改善对结核病大流行的控制。迄今为止，已经报道了几种能够模仿人类新生肉芽肿的体外模型。在这里我们描述一个协议，其中Mtb 被感染的人外周血单核细胞（PBMC）嵌入胶原蛋白基质中，导致形成三维微肉芽肿。随后，可以检索PBMC和Mtb，从而从宿主和病原体中读取多参数。除了并入生理性细胞外基质外，该模型还具有重现休眠样Mtb特征的独特优势，以及在免疫调节治疗下观察到的Mtb复苏的再生，其他已发表的体外实验方法尚未见报道。肉芽肿。
关键词：分枝杆菌，浴池erculosis，肉芽肿，主机，我ñ体外模型，休眠，复苏
[背景]结核病（TB）是一种空气传播的疾病，其包括由人类病原体肺和肺外感染结核分枝杆菌（Mtb的）。结核病在2019年估计造成150万人死亡（世卫组织，2019年），仍然是世界上最致命的传染病。结核病免疫发病机制的特点是形成了组织性的，称为肉芽肿的多细胞簇（Gengenbacher和Kaufmann，2012）。这些结构主要由被感染的和未感染的巨噬细胞的核心组成，周围是淋巴细胞边缘。肉芽肿内的敌对环境推动Mtb进入可能与疾病的潜在形式相关的缓慢或非复制性休眠状态。因此，Mtb休眠导致对针对分枝杆菌复制过程中活跃的代谢途径的抗生素的耐受性增加。 ...
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| Giant Mimiviridae CsCl Purification Protocol
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Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] While different giant viruses’ purification protocols are available, they are not fully described and they use sucrose gradient that does not reach an equilibrium. Here, we report a protocol for the purification of members of the Mimiviridae family virions resulting from Acanthamoeaba castellanii infections. Viruses are harvested after cell lysis and purified through a high density CsCl gradient to optimize the isolation of the virus from the cell debris or other potential contaminants. Due to the large size of the virion capsids, reaching half a micrometer diameter, ...
[摘要] [摘要]虽然有不同的巨型病毒纯化方案，但它们并没有被完全描述，它们使用的蔗糖梯度不能达到平衡。在这里，我们报告了一个方案，用于纯化由棘球绦虫感染引起的拟病毒科成员病毒。病毒在细胞裂解后收获，并通过高密度CsCl梯度进行纯化，以优化从细胞碎片或其他潜在污染物中分离病毒。由于病毒粒子衣壳尺寸大，直径可达半微米，因此可以通过光学显微镜来监控工艺的质量。由此得到的纯化颗粒可用于进行新的感染、DNA提取、结构研究、糖成分分析、亚组分鉴定或蛋白质组学实验。
[背景]Mimivirus是第一种在光学显微镜下可见的病毒，在大小和基因组复杂度上与单细胞生物重叠，这一发现开创了病毒学的新研究领域（La Scola et al.，2003；Raoult et al.，2004）。在过去的15年里，许多额外的米病毒科成员被从各种环境中分离出来，并且已经发布了几种纯化病毒离子的方案（La Scola等人，2003年；Byrne等人，2009年；Arslan等人，2011年；Philippe等人，2013年；Campos等人，2014年；Andrade等人，2017年）。开发了不同的方法，主要涉及蔗糖缓冲（Campos et al.，2014；Andrade et al.，2017）或蔗糖不连续梯度（Arslan et ...
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| Efficient Agrobacterium-mediated Transformation of the Elite–Indica Rice Variety Komboka
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Author:
Van T. Luu, Melissa Stiebner, Paula Emmerich Maldonado, Sandra Valdés, Didier Marín, Gerardo Delgado, Virginia Laluz, Lin-Bo Wu, Paul Chavarriaga, Joe Tohme, Inez H. Slamet-Loedin and Wolf B. Frommer,
Date:
2020-09-05
[Abstract] Genetic transformation is crucial for both investigating gene functions and for engineering of crops to introduce new traits. Rice (Oryza sativa L.) is an important model in plant research, since it is the staple food for more than half of the world’s population. As a result, numerous transformation methods have been developed for both indica and japonica rice. Since breeders continuously develop new rice varieties, transformation protocols have to be adapted for each new variety. Here we provide an optimized transformation protocol with detailed tips and tricks for ...
[摘要]
[摘要 ] 遗传转化对于研究基因功能和农作物工程引入新性状均至关重要。水稻（Oryza sativa L.）是植物研究中的重要模型，因为它是世界一半以上人口的主食。其结果是，大量的转化方法已经开发了两个籼稻和粳稻米。由于育种者不断开发新的水稻品种，因此必须针对每个新品种适应转化方案。在这里，我们为使用未成熟胚的非洲新品种Komboka 提供了一种优化的转化协议，包括详细的技巧和窍门。在Komboka中，我们使用此优化方案对GUS / GFP报告基因构建体的表观转化率高达48％。该协议也适用于其他优质lite 稻品种。
[背景 ] 为植物的遗传转化的各种方法公顷一直在开发，例如穿孔（Shimamoto PEG介导的原生质体转染。等人，1989;达塔。等人，1992），生物射弹转化（Christou的等人，1991）和农杆菌-介导的转化（Slamet-Loedin 等，2014）。农杆菌介导的转化是将DNA引入植物的最广泛使用的方法之一（van Wordragen and Dons，1992）。该方法已被广泛用于研究，并已成为生物技术的关键先决条件。自从开发新的育种技术（如基因组编辑）以来，它就变得越来越重要（Char ...
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