| Isolation and Cultivation of Primary Brain Endothelial Cells from Adult Mice
|
|
Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Brain endothelial cells are the major building block of the blood-brain barrier. To study the role of brain endothelial cells in vitro, the isolation of primary cells is of critical value. Here, we describe a protocol in which vessel fragments are isolated from adult mice. After density centrifugation and mild digestion of the fragments, outgrowing endothelial cells are selected by puromycin treatment and grown to confluence within one week.
[摘要] 脑内皮细胞是血脑屏障的主要组成部分。 为了研究脑内皮细胞在体外的作用，原代细胞的分离是临床价值。 在这里，我们描述了一种方案，其中血管片段与成年小鼠分离。 在密度离心和片段的温和消化后，通过嘌呤霉素处理选择出生长的内皮细胞，并在一周内生长至汇合。
【背景】血脑屏障保护大脑免受细胞和物质的不受控制的侵入。 这主要是由脑内皮细胞形成的屏障组成的紧密和粘附连接限制细胞旁运输。
该方案被开发以克服维持其关键特征的小鼠脑内皮细胞系的有限可用性，例如表达足够量的紧密连接蛋白如闭合蛋白，ZO-1或紧密连接蛋白-5以诱导高跨内皮细胞抗性。
此外，从内含基因修饰的小鼠中分离脑内皮细胞可以在体外研究基因特异性功能。
使用这种方法，我们以前补充了体内研究，证明NF-κB信号在脑内皮细胞中维持正常血脑屏障功能的重要性（Ridder等，2015）。
|
|
|
| Isolation and Immortalization of Fibroblasts from Different Tumoral Stages
|
|
Author:
Date:
2014-04-05
[Abstract] Tumour microenvironment and cancer-associated fibroblasts in particular exhibit tumour promoting abilities that are not present in their normal counterparts (Calvo et al., 2013; Hanahan and Coussens, 2012). Therefore, functional and molecular characterization of the modifications occurring in fibroblasts during tumour progression is essential to fully understand their role in tumour progression. Previous studies have addressed this issue using human fibroblasts and comparing normal and adjacent fibroblasts to tumour-associated fibroblasts (Kalluri and Zeisberg, 2006). However, ...
[摘要] 肿瘤微环境和癌相关成纤维细胞特别表现出其正常对应物中不存在的肿瘤促进能力（Calvo等人，2013; Hanahan和Coussens，2012）。因此，在肿瘤进展期间发生在成纤维细胞中的修饰的功能和分子表征是完全理解它们在肿瘤进展中的作用所必需的。以前的研究已经解决了这个问题使用人类成纤维细胞和比较正常和相邻成纤维细胞与肿瘤相关的成纤维细胞（Kalluri和Zeisberg，2006）。然而，这些研究受到人类样品的内在变异性（例如配对，年龄，基因组景观，等）的阻碍。为了克服这些问题，我们使用了完全表征的小鼠乳腺癌模型MMTV-PyMT（Guy等人，1992; Lin等人，2003）。 MMTV-PyMT转基因小鼠在小鼠乳腺肿瘤病毒启动子/增强子的指导下表达多瘤病毒中T抗原。这是一个多焦点管腔乳腺癌模型，经历良好定义和特征阶段（即增生，腺瘤，癌和浸润性癌）。有趣的是，这种模型有100％的发病率，是非常结构性的（呈现高浓度的成纤维细胞），并引起肺自发转移80-94％的发病率。重要的是，至少对于腹股沟乳腺（腺4和9），不同的肿瘤阶段与小鼠的年龄很好相关：在6周龄时出现的增生，6-8周龄之间的腺瘤，癌和侵袭性癌症从8周开始。该模型使我们可靠地分离来自不同肿瘤阶段的成纤维细胞，并仔细表征其功能和分子性质（Calvo等人，2013）。
|
|
|