| Genomic Edition of Ashbya gossypii Using One-vector CRISPR/Cas9
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Author:
Date:
2020-06-20
[Abstract] The CRISPR/Cas9 system is a novel genetic tool which allows the precise manipulation of virtually any genomic sequence. In this protocol, we use a specific CRISPR/Cas9 system for the manipulation of Ashbya gossypii. The filamentous fungus A. gossypii is currently used for the industrial production of riboflavin (vitamina B2). In addition, A. gossypii produces other high-value compounds such as folic acid, nucleosides and biolipids. A large molecular toolbox is available for the genomic manipulation of this fungus including gene targeting methods, rapid assembly of ...
[摘要] [摘要] CRISPR/Cas9系统是一种新的基因工具，可以精确地操作几乎所有的基因组序列。在这个协议中，我们使用一个特定的CRISPR/Cas9系统来操纵棉蚜。丝状真菌A.gossypii目前用于核黄素（vitamina B2）的工业生产。此外，棉蚜还产生其他高价值化合物，如叶酸、核苷和生物脂类。一个大型的分子工具箱可用于该真菌的基因组操作，包括基因靶向方法、异源表达模块的快速组装，以及最近一个适用于棉铃虫的单载体CRISPR/Cas9编辑系统，该系统允许实施无标记工程策略。CRISPR/Cas9系统包括RNA引导的DNA内切酶（Cas9）和与基因组靶区互补的引导RNA（gRNA）。Cas9核酸酶需要5′-NGG-3′三核苷酸，称为原间隔基序（PAM），在基因组靶区产生一个双链断裂（DSB），该断裂可以通过同源重组（HR）由合成的致突变供体DNA（dDNA）修复，从而引入一个特定的设计突变。适用于棉铃虫的CRISPR/Cas9系统极大地促进了这种工业真菌的基因组编辑。
[背景] ...
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| Simultaneous Intranasal/Intravascular Antibody Labeling of CD4+ T Cells in Mouse Lungs
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] CD4+ T cell responses have been shown to be protective in many respiratory virus infections. In the respiratory tract, CD4+ T cells include cells in the airway and parenchyma and cells adhering to the pulmonary vasculature. Here we discuss in detail the methods that are useful for characterizing CD4+ T cells in different anatomic locations in mouse lungs.
[摘要] 许多呼吸道病毒感染中CD4细胞反应已被证明是保护性的。在呼吸道中，CD4 + T细胞包括气道中的细胞和附着于肺血管的细胞和细胞。在这里，我们详细讨论了可用于表征小鼠肺不同解剖位置的CD4 + T细胞的方法。
背景 为了区分循环和组织中的记忆T细胞，已经开发了一种T细胞血管内染色的方法（Anderson等人，2012）。这种方法被广泛用于定义许多器官和组织（包括肺，脾和肠）的记忆T细胞。然而，呼吸道中的记忆T细胞位于三个独特的解剖位置，即气道，薄壁组织和肺血管。血管内染色不能区分气道和实质中的细胞，因为它们都是从循环中分离的，血管内施用的抗体不会污染这两个群体。我们设计了同时进行的鼻内/血管内抗体标记测定，可以使用最少量的抗体来标记和区分所有三个位置的细胞。
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| The Chick Embryo Chorioallantoic Membrane as an in vivo Model to Study Metastasis
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Author:
Date:
2016-10-20
[Abstract] Metastasis is a complex process that includes several steps: neoplastic progression, angiogenesis, cell migration and invasion, intravasation into nearby blood vessels, survival in the circulatory system, extravasation followed by homing into distant tissues, the formation of micrometastases, and finally the growth into macroscopic secondary tumors. This complexity makes metastases difficult to investigate and quantify in animal models. The chick embryo is a unique in vivo model that overcomes many limitations for studying the metastatic process, due to the accessibility of the ...
[摘要] 转移是一个复杂的过程，包括几个步骤：肿瘤进展，血管生成，细胞迁移和入侵，附近血管内渗，循环系统中的生存，外渗，然后归巢到远端组织，微转移的形成，最后生长宏观继发性肿瘤。这种复杂性使得转移瘤难以在动物模型中研究和量化。鸡胚是独特的体内模型，其克服了用于研究转移过程的许多限制，这是由于绒毛尿囊膜（CAM）的可接近性，所述绒毛尿囊膜是位于蛋壳下的良好血管化的胚胎外组织，其接受哺乳动物肿瘤细胞（包括人）的异种移植。由于鸡胚在此阶段是天然免疫缺陷的，所以CAM可以支持肿瘤细胞的植入，并且其中的生长可忠实地重现致癌过程的大多数特征，包括：生长，侵入，血管生成和远端组织的定居（Deryugina和Quigley，2008; Zijlstra等人，2002）。 CAM在癌细胞移植后5-7天内维持快速肿瘤形成。这个特征提供了用于快速研究转移性级联的灌注和定植步骤的独特实验模型。此外，使用定量PCR来检测物种特异性序列，例如Alu ，鸡胚CAM模型可用于监测和定量在远端组织中异种移植的异位肿瘤细胞的存在。因此，鸡胚模型已经证明是用于癌症研究的有价值的工具，特别是用于研究癌症转移中涉及的分子和途径，并分析转移性癌症对潜在疗法的反应（Herrero等人 。，2015; Casar 。，2014）。在这方面，使用快速和定量的自发转移鸡胚胎模型可以提供用于筛选抗癌剂的常规小鼠模型系统的替代方法。
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