| A Parkinson’s Disease-relevant Mitochondrial and Neuronal Morphology High-throughput Screening Assay in LUHMES Cells
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Parkinson’s disease is a devastating neurodegenerative disorder affecting 2-3% of the population over 65 years of age. There is currently no disease-modifying treatment. One of the predominant pathological features of Parkinson’s disease is mitochondrial dysfunction, and much work has aimed to identify therapeutic compounds which can restore the disrupted mitochondrial physiology. However, modelling mitochondrial dysfunction in a disease-relevant model, suitable for screening large compound libraries for ameliorative effects, represents a considerable challenge. Primary patient ...
[摘要] [摘要]帕金森氏病是一种破坏性神经退行性疾病，影响65岁以上人口的2-3％。目前尚无改善疾病的治疗方法。帕金森氏病的主要病理特征之一是线粒体功能障碍，许多工作旨在鉴定可恢复破坏的线粒体生理的治疗性化合物。然而，在疾病相关模型中对线粒体功能障碍进行建模，适用于筛选大型化合物文库的改善作用，这是一个巨大的挑战。病人原代细胞，SHSY-5Y细胞和体内 帕金森氏病模型被广泛用于研究线粒体功能障碍在帕金森氏症中的作用。确实，许多研究已经利用LUHMES细胞研究帕金森氏病，但是，尽管与其他常用模型相比，LUHMES细胞与其他常用模型相比具有多种优势，例如快速分化和高均一性，但以前并未用作PD相关的线粒体功能障碍的复合筛选模型。 （例如，与来自iPSC的神经元相反），以及与人类中脑组织相关的生理学，能够分化为高度表达特征性标记的多巴胺能样神经元。在先前产生GFP + -LUHMES细胞以模拟代谢功能障碍后，我们报道了在PD相关的线粒体功能障碍恢复模型中使用GFP + -LUHMES细胞进行高通量化合物筛选的方案。该协议描述了通过评估一系列线粒体和神经元形态学参数，使用强大且可重现的毒素诱导的GFP + -LUHMES细胞模型进行高通量化合物筛选的方法。我们还提供了有关数据和统计分析的详细说明，包括Z'得分的示例计算，以评估独立实验中的统计效应大小。
[背景]帕金森氏病（PD）是一种神经退行性疾病，其主要特征是中脑黑质中多巴胺能神经元的丢失以及神经元内包涵体中α-突触核蛋白的积累。它是第二种最常见的神经退行性疾病，影响65岁以上人口中2-3％的人口（Poewe ...
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| GC/MS-based Analysis of Volatile Metabolic Profile Along in vitro Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) are a promising tool in cell-based therapies for degenerative diseases. A safe application of hiPSCs in vivo, requires the detection of the presence of residual undifferentiated pluripotent cells that can potentially cause the insurgence of teratomas. Several studies point out that metabolic products may provide an alternative method to identify the different steps of cells differentiation. In particular, the analysis of volatile organic compounds (VOCs) is gaining a growing interest in this context, thanks to its inherent ...
[摘要] 人诱导的多能干细胞（hiPSC）是用于退化性疾病的基于细胞的疗法中的有前景的工具。 hiPSCs在体内的安全应用需要检测残留未分化多能细胞的存在，这可能会导致畸胎瘤的爆发。几项研究指出，代谢产物可能提供了另一种方法来确定细胞分化的不同步骤。特别是挥发性有机化合物（VOCs）的分析由于其固有的非侵入性而在这方面越来越受到关注。在这里，说明了从人诱导的多能干细胞（hiPSC）分析VOC的方案。它基于固相微萃取（SPME）技术与气相色谱 - 质谱联用（GC / MS）。该方法用于测量从绒毛膜样品（CVS）到hiPSC的细胞重编程期间和沿着hiPSC体外分化成早期神经祖细胞（NP）的细胞顶空中的挥发性代谢物修饰，穿过胚状体机构（EBs）的形成。
【背景】提出细胞代谢作为在分化的各个步骤期间研究干细胞的替代物。事实上，假设干细胞从多能性向完全分化的转变可能引起代谢产物的剧烈变化是合理的。在诱导的多能干细胞，亲本成纤维细胞和胚胎干细胞之间观察到了这种假设的第一个证据（Meissen等人，2012）。
在代谢产物中，挥发性有机化合物（VOC）吸引了人们对其收集的简单性，内在的非侵入性和广泛的分析方法的广泛关注（Boots et。，2015 ...
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