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Date:
2016-09-20
[Abstract] Recently, we identified two host cell-derived proteins as novel stimulatory factors of influenza virus RNA replication process, termed “Influenza virus REplication Factor-2 (IREF-2)”, from human nuclear extracts (NEs) by employing biochemical complementation assays (Sugiyama et al., 2015). Herein, we describe detailed methods for successive procedures for identification and purification of IREF-2, including large-scale suspension culture of HeLa S3 cells, preparation of NEs and separation of IREF-2 by sequential column chromatography steps. This protocol can be modified and used for ...
[摘要] 最近,我们通过使用生物化学互补试验(Sugiyama),从人类核提取物(NE)鉴定了两种宿主细胞衍生蛋白作为流感病毒RNA复制过程的新型刺激因子,称为“流感病毒复制因子-2(IREF-2)” et al。,2015)。 本文描述了用于IREF-2鉴定和纯化的连续方法的详细方法,包括HeLa S3细胞的大规模悬浮培养,NE的制备和顺序柱色谱步骤分离IREF-2。 该方案可以修改并用于纯化和鉴定您感兴趣的其他未知核蛋白。 【背景】甲型流感病毒基因组由8个分段和单链RNA(vRNA)组成。其转录和复制由病毒编码的RNA依赖性RNA聚合酶(RdRP)催化。几条证据表明某些宿主衍生因子调节病毒RNA合成(Nagata et al。,2008)。最近,通过相互作用分析和基因组RNAi筛选研究,已经报道了各种宿主衍生的蛋白质作为与病毒RNA合成相关的调节因子候选物。然而,其中包括间接涉及病毒RNA合成的一些假阳性相互作用因子和因子。相反,为了鉴定在病毒RNA合成过程中发挥直接作用的可靠和重要的宿主因子,我们使用了生物化学互补测定系统。在该系统中,在感染的细胞核中有效发生的病毒vRNA复制反应被解剖并在体外使用病毒RNA复制所必需的病毒因子重构,例如衍生自洗涤剂溶解的病毒颗粒的病毒RdRP和模型病毒基因组RNA模板和未感染的核提取物(NE)。 最近,我们已经报道,在体外用病毒因子和NE的粗制部分再现有效的vRNA复制(Sugiyama等,2015)。 ...
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Date:
2015-05-05
[Abstract] Multiple viruses can co-infect the genital tract, modifying the immunologic and virologic milieu and possibly playing a role in viral transmission and pathogenesis. The aim of our studies has been to understand the complex relationships between HIV-1 RNA, and multiple human herpesviruses known to frequently replicate in the genital tract of HIV-infected men (i.e. cytomegalovirus [CMV], Epstein Bar virus [EBV], herpes simplex virus [HSV] types 1 and 2, and human herpesviruses [HHV] 6, 7 and 8) (Gianella et al., 2013a; Gianella et al., 2013b; Gianella et al., ...
[摘要] 多种病毒可以共感染生殖道,修改免疫学和病毒学环境,并可能在病毒传播和发病中起作用。 我们的研究的目的是了解HIV-1 RNA和已知在HIV感染的男性生殖道中经常复制的多种人疱疹病毒之间的复杂关系(即巨细胞病毒[CMV],Epstein 条形病毒[EBV],单纯疱疹病毒[HSV] 1型和2型,以及人疱疹病毒[HHV] 6,7和8)(Gianella等人,2013a; Gianella等人 。,2013b; Gianella 等人,2013c; Gianella ,2014)。 该方案设计用于收集和处理男性生殖器分泌(GS),并使用定量实时PCR技术从精浆中分离并进一步定量7个HHV的HIV RNA和DNA。
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