| Cell Synchronization by Double Thymidine Block
|
|
Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Cell synchronization is widely used in studying mechanisms involves in regulation of cell cycle progression. Through synchronization, cells at distinct cell cycle stage could be obtained. Thymidine is a DNA synthesis inhibitor that can arrest cell at G1/S boundary, prior to DNA replication. Here, we present the protocol to synchronize cells at G1/S boundary by using double thymidine block. After release into normal medium, cell population at distinct cell cycle phase could be collected at different time points.
[摘要] 细胞同步广泛用于研究涉及细胞周期进程调节的机制。 通过同步，可以获得不同细胞周期阶段的细胞。 胸苷是一种DNA合成抑制剂，可在DNA复制前阻止细胞在G1 / S边界。 在这里，我们提出了使用双胸苷阻滞同步G1 / S边界细胞的协议。 释放到正常培养基中后，可以在不同的时间点收集不同细胞周期阶段的细胞群。
【背景】细胞周期和细胞分裂是细胞生物学的核心。为了构建多细胞生物体，细胞复制对于产生可以执行特定功能的特化细胞是必需的。正常细胞周期由间期（G1期，S期和G2期）和有丝分裂期（M期）组成（Rodríguez-Ubreva et al。，2010;Léger et al。 ，2016）。在间期期间，遗传物质被复制并使一切为有丝分裂做好准备。然而，在有丝分裂期，重复的染色体被分离并分配到子细胞中（Sakaue-Sawano 等人，，2008）。
为了精确保存遗传信息，必须严格控制细胞周期进程。细胞周期蛋白/ CDK复合物通过在各自阶段快速促进活动来控制细胞周期进展，并且当它们的阶段完成时迅速失活（Graña和Reddy，1995）。
细胞同步对于研究细胞周期调节事件特别有用。使用不同的方法，细胞可以在不同的细胞周期阶段同步。治疗作为微管形成抑制剂的诺考达唑可以使细胞处于G2 / M期同步（Ho et ...
|
|
|
| Induction of Natural Competence in Genetically-modified Lactococcus lactis
|
|
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Natural competence can be activated in Lactoccocus lactis subsp lactis and cremoris upon overexpression of ComX, a master regulator of bacterial competence. Herein, we demonstrate a method to activate bacterial competence by regulating the expression of the comX gene by using a nisin-inducible promoter in an L. lactis strain harboring either a chromosomal or plasmid-encoded copy of nisRK. Addition of moderate concentrations of the inducer nisin resulted in concomitant moderate levels of ComX, which led to an optimal transformation rate ...
[摘要] 在过度表达细菌能力的主要调节因子ComX后，天然能力可以在乳酸乳球菌亚种乳酸和 cremoris 中激活。 在本文中，我们展示了通过在 L中使用乳链菌肽诱导型启动子调节 comX 基因的表达来激活细菌能力的方法。 含有 nisRK 的染色体或质粒编码拷贝的lactis 菌株。 加入中等浓度的诱导剂乳链菌肽导致伴随的中等水平的ComX，其导致最佳转化率（1.0×10 2 sup / -6>转化子/总细胞数/ g质粒DNA）。 在此，提出了用于能力归纳的优化协议的详细描述。
【背景】自然能力是细菌通过专门的摄取机制获得外源DNA的过程，之后内化的DNA整合到其基因组中或作为质粒DNA维持。一些细菌在特定的环境触发因素如基因毒性应激或饥饿时进入能力状态（Seitz和Blokesch，2013; Blokesch，2016）。群体感应系统，如 comCDE 或 comRS ，控制着革兰氏阳性菌的自然能力的激活（Håvarstein et al。，1995; Pestova et al。，1996; Kleerebezem et al。，1997b; Fontaine et al。，2015）。更具体地说， comC 和 comS 编码信息素，而 comD 编码组氨酸激酶和 comE 和 comR 编码响应调节器（Håvarstein et al。，1995; ...
|
|
|
| Analysis of Chromosome Condensation/Decondensation During Mitosis by EdU Incorporation in Nigella damascena L. Seedling Roots
|
|
Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] To investigate the chromosome dynamics during mitosis, it is convenient to mark the discrete chromosome foci and then analyze their spatial rearrangements during prophase condensation and telophase decondensation. To label the chromosome regions in plant chromosomes, we incorporated the synthetic nucleotide, 5-ethynyl-2’-deoxyuridine (EdU), which can be detected by click-chemistry, into chromatin during replication. Here, we described a protocol of a method based on the application of semi-thin sections of Nigella damascena L. roots embedded in LR White acrylic resin. The thickness ...
[摘要] 为了研究有丝分裂期间的染色体动力学，可以方便地标记离散的染色体焦点，然后分析它们在前期缩合和末期解聚期间的空间重排。 为了在植物染色体上标记染色体区域，我们将可以通过点击化学检测的合成核苷酸5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）掺入染色质中。 在这里，我们描述了一种方法的协议，该方法基于嵌入在LR白色丙烯酸树脂中的
【背景】关于染色体组织的大多数数据是从少数模式生物的研究中获得的，其中大部分是哺乳动物。在具有大基因组的植物中，染色体显着大于迄今为止研究的动物染色体。为了研究有丝分裂期间的染色体动力学，有必要标记离散的染色体焦点，然后分析它们在前期凝结和末期解聚过程中的空间重排。为了标记染色体区域，我们引入了合成的核苷酸5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）（Kuznetsova等人，2017）。 EdU的检测基于点击反应，其是叠氮化物和炔烃之间的铜催化反应。 EdU含有可与含叠氮化物的检测试剂反应的炔。
在S期后期并入EdU的细胞中可看到标记区域（即，分离的标记的点）的最合适的分布。短脉冲标记了所有S期细胞，并且EdU标记的有丝分裂图的初始外观因此表示在S期晚期标记的细胞穿过有丝分裂所需的时间。 ...
|
|
|