| Mouse Model of Immune Complex-mediated Vasculitis in Dorsal Skin and Assessment of the Neutrophil-mediated Tissue Damage
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Neutrophils are the most abundant leukocytes in the blood. In the recent decades, their crucial roles in host defense, immune regulation and tissue damage have been studied in a deeper dimension. In this protocol, we described a mouse model of immune complex-mediated vasculitis in the dorsal skin induced by Arthus reaction, and the subsequent analysis of edema, hemorrhage and tissue damage due to neutrophil activation by means of Evans blue area analysis, histology, and immunofluorescence. This protocol could facilitate the investigation of cellular therapy strategy against over-activated ...
[摘要] 嗜中性粒细胞是血液中最丰富的白细胞。 近几十年来，它们在宿主防御，免疫调节和组织损伤方面的关键作用已经得到了更深入的研究。 在这个协议中，我们描述了Arthus反应诱导的背部皮肤中的免疫复合物介导的血管炎的小鼠模型，以及随后通过伊文思蓝区域分析，组织学和分析由于嗜中性粒细胞活化引起的水肿，出血和组织损伤免疫荧光。 该协议可以促进细胞治疗策略对过度活化的嗜中性粒细胞介导的组织损伤的调查。
【背景】嗜中性粒细胞构成循环白细胞的最大的进化保守部分。他们引导第一波主机防御感染或组织损伤。嗜中性粒细胞介导的细胞毒性的体外模型已被充分证实（Incani等人，1981; Dallegri等人，1984; Saffarzadeh等人，等人，2012年）。但是，为了剖析中性粒细胞介导的无菌组织损伤的复杂性，“体内”模型是必不可少的。
免疫复合物（IC）介导的血管炎是由抗原 - 抗体复合物在血管中沉积引发的疾病，其随后导致补体激活，嗜中性粒细胞募集和活化。活化的嗜中性粒细胞释放的大量活性氧和蛋白酶损害血管壁的内皮衬里并导致水肿和出血（Sindrilaru等人，2007; Goerge等人， ，2008; ...
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| Quantitative Image Analysis of Membrane Microdomains Labelled by Fluorescently Tagged Proteins in Arabidopsis thaliana and Nicotiana benthamiana
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Author:
Date:
2015-06-05
[Abstract] We have recently characterized co-existing membrane microdomains that are labeled by different proteins in living plant cells (Jarsch et al., 2014). For this approach we first created a digital fingerprint for each of the twenty marker proteins using quantitative image analysis. Here we recorded parameters such as domain size, density and shape based on image segmentation. We found highly reproducible patterns of any of the proteins over a large number of biological replicates. Furthermore we exclusively acquired images from lowly expressing cells and chose our imaging conditions in ...
[摘要] 我们最近描述了在活植物细胞中由不同蛋白质标记的共存膜微结构域（Jarsch等人，2014）。对于这种方法，我们首先使用定量图像分析为二十个标记蛋白质中的每一个创建数字指纹。这里我们基于图像分割记录诸如域大小，密度和形状的参数。我们发现任何蛋白质的高度可重复的模式在大量的生物复制。此外，我们专门从低表达细胞中获取图像，并选择我们的成像条件以产生没有像素饱和的图像。
该方案详细描述了用于分析成员的定位差异的方法的拟南芥（Arabidopsis thaliana）和本塞姆氏烟草（Nicotiana benthamiana）的膜微结构域中的remorin蛋白家族（Jarsch等人，2014）。蛋白质单独地或成对地表达为相应植物中的荧光团融合体。使用标准共焦激光扫描显微镜（CLSM）进行图像采集，并使用ImageJ进行图像分析。
[简介] ...
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| Axenic Culture of Sclerotinia sclerotiorum and Preparation of Sclerotinia Culture Filtrate Elicitor 1 (SCFE1)-containing Fractions, Triggering Immune Responses in Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2014-09-05
[Abstract] The necrotrophic white mold fungus Sclerotinia sclerotiorum (S. sclerotiorum) is pathogenic to a broad range of plant species, including the Brassicaceae model plant Arabidopsis thaliana (Boland and Hall, 1994; Bolton et al., 2006). In Arabidopsis thaliana (A. thaliana), the semi-purified proteinaceous S. sclerotinorum elicitor SCFE1 (Sclerotinia culture filtrate elicitor 1) is sensed at the plasma membrane by the receptor-like protein RLP30 and triggers strong immune responses (Zhang et al., 2013), similar to ...
[摘要] 坏死性白霉菌真菌（Sclerotinia sclerotiorum）（核盘菌）对广泛的植物物种（包括十字花科模式植物拟南芥（Arabidopsis thaliana））具有致病性， （Boland和Hall，1994; Bolton等人，2006）。在拟南芥中（thaliana），是半纯化的蛋白质。通过受体样蛋白RLP30在质膜感测核盘菌诱导物SCFE1（核盘菌属培养物滤液诱发物1），并且引发强烈的免疫应答（Zhang等人。，2013），类似于细菌激发剂鞭毛蛋白（Felix等人，1999）。植物防御与SCFE1的诱导是一个工具，以解剖涉及RLP30的信号通路和研究对坏死性真菌的免疫。在这里，我们描述一个简单的协议来生长。菌核。此外，我们提出了一种两步液相色谱法从培养滤液中部分纯化SCFE1的方法（图1A-B）。通过气相色谱法测定植物应激激素乙烯的发射作为生物测定，以在整个纯化程序中监测级分中的激发剂活性（图1C）。
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