| The Chick Embryo Chorioallantoic Membrane as an in vivo Model to Study Metastasis
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Author:
Date:
2016-10-20
[Abstract] Metastasis is a complex process that includes several steps: neoplastic progression, angiogenesis, cell migration and invasion, intravasation into nearby blood vessels, survival in the circulatory system, extravasation followed by homing into distant tissues, the formation of micrometastases, and finally the growth into macroscopic secondary tumors. This complexity makes metastases difficult to investigate and quantify in animal models. The chick embryo is a unique in vivo model that overcomes many limitations for studying the metastatic process, due to the accessibility of the ...
[摘要] 转移是一个复杂的过程，包括几个步骤：肿瘤进展，血管生成，细胞迁移和入侵，附近血管内渗，循环系统中的生存，外渗，然后归巢到远端组织，微转移的形成，最后生长宏观继发性肿瘤。这种复杂性使得转移瘤难以在动物模型中研究和量化。鸡胚是独特的体内模型，其克服了用于研究转移过程的许多限制，这是由于绒毛尿囊膜（CAM）的可接近性，所述绒毛尿囊膜是位于蛋壳下的良好血管化的胚胎外组织，其接受哺乳动物肿瘤细胞（包括人）的异种移植。由于鸡胚在此阶段是天然免疫缺陷的，所以CAM可以支持肿瘤细胞的植入，并且其中的生长可忠实地重现致癌过程的大多数特征，包括：生长，侵入，血管生成和远端组织的定居（Deryugina和Quigley，2008; Zijlstra等人，2002）。 CAM在癌细胞移植后5-7天内维持快速肿瘤形成。这个特征提供了用于快速研究转移性级联的灌注和定植步骤的独特实验模型。此外，使用定量PCR来检测物种特异性序列，例如Alu ，鸡胚CAM模型可用于监测和定量在远端组织中异种移植的异位肿瘤细胞的存在。因此，鸡胚模型已经证明是用于癌症研究的有价值的工具，特别是用于研究癌症转移中涉及的分子和途径，并分析转移性癌症对潜在疗法的反应（Herrero等人 。，2015; Casar 。，2014）。在这方面，使用快速和定量的自发转移鸡胚胎模型可以提供用于筛选抗癌剂的常规小鼠模型系统的替代方法。
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| Isolation and Primary Culture of Adult Mouse Cardiac Fibroblasts
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Author:
Date:
2016-07-05
[Abstract] Fibroblasts are often used as a feeder layer for progenitor or stem cells in co-culture systems. In the heart fibroblasts are important for cardiac development, homeostasis, and remodelling. They provide cardiomyocytes and progenitor cells not only with nutrition but also secrete extracellular matrix that forms the microenvironment that ensures cell survival and function. Although different kinds of mouse fibroblasts have been used in co-cultures (embryonic, skin and cardiac fibroblasts) adult mouse cardiac fibroblasts (AMCFs) create the closest microenvironment to the adult murine heart for ...
[摘要] 成纤维细胞通常用作共培养系统中的祖细胞或干细胞的饲养层。 在心脏成纤维细胞对于心脏发育，体内平衡和重塑是重要的。 他们提供心肌细胞和祖细胞不仅与营养，而且分泌细胞外基质，形成微环境，确保细胞的生存和功能。 尽管不同种类的小鼠成纤维细胞已用于共培养（胚胎，皮肤和心脏成纤维细胞），但是成年小鼠心脏成纤维细胞（AMCFs）为培养成年小鼠心脏祖细胞产生了与成年鼠心脏最接近的微环境。 该协议描述了从成年小鼠心脏分离心脏成纤维细胞以及它们在培养物中的维持。
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| In vitro mTORC1 Kinase Assay for Mammalian Cells Protocol
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Author:
Date:
2016-06-05
[Abstract] Historically, mechanistic target of rapamycin (mTOR) was purified from mammalian cells using mild nonionic detergents such as NP-40 and or Triton-X100 that resulted in dissociation of core regulatory components essential for its native kinase activity. Consequently, these older kinase assays required MnCl2 to artificially enhance the weak phosphotransfer activity observed (Bai et al., 2007; Kim et al., 2002). With the use of the zwitterionic detergent 3-[(3-Cholamidopropyl) dimethylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS), the mTOR complex 1 (mTORC1) containing ...
[摘要] 历史上，使用温和的非离子去污剂如NP-40和或Triton-X100从哺乳动物细胞纯化雷帕霉素（mTOR）的机械目标，导致其天然激酶活性所必需的核心调节组分的解离。因此，这些较老的激酶测定需要MnCl 2以人工增强观察到的弱磷酸转移活性（Bai等人，2007; Kim等人）。 ，2002）。使用两性离子去污剂3 - [（3-胆碱酰氨基丙基）二甲基铵基] -1-丙磺酸盐（CHAPS），含有mTOR（Raptor）和Lst8（也称为GbetaL）的调节相关蛋白的mTOR复合物1（mTORC1）可以成功地纯化为复合物。这种体外激酶测定允许纯化类似于其生理状态并在生理性MgCl 2浓度下保持激酶活性的mTORC1（Sancak等人）。 ，2007）。 mTORC1的活性可以通过使用mTOR的激酶结构域内的过度活跃突变或包含补充到体外激酶测定中的富含脑部（Rheb）的GTP结合的RAS来进一步增强。 Rheb是结合并激活mTORC1以磷酸化下游底物的小G蛋白，例如真核起始因子4E-BP1（4E-BP1）（Burnett等人，1998），核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）（Kim等人，2002），信号转导物和转录激活因子3（STAT3）（Dodd等人，2015）和脯氨酸富集的40kDa的Akt底物（PRAS40）（Dunlop等人，2009）。
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