| 3D Culture Protocol for Testing Gene Knockdown Efficiency and Cell Line Derivation
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Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract] Traditional 2D cell cultures with cells grown as monolayers on solid surface still represent the standard method in cancer research for drug testing. Cells grown in 2D cultures, however, lack relevant cell-matrix and cell-cell interactions and ignore the true three-dimensional anatomy of solid tumors. Cells cultured in 2D can also undergo cytoskeletal rearrangements and acquire artificial polarity associated with aberrant gene expression (Edmondson et al., 2014). 3D culture systems that better mimic the in vivo situation have been developed recently. 3D in vitro ...
[摘要] 细胞在固体表面生长为单层的传统二维细胞培养仍然代表了药物检测癌症研究的标准方法。然而，在2D培养物中生长的细胞缺乏相关的细胞基质和细胞 - 细胞相互作用，并且忽略实体肿瘤的真实三维解剖结构。在2D中培养的细胞也可经历细胞骨架重排并获得与异常基因表达相关的人造极性（Edmondson等人，2014）。最近开发出更好地模拟体内情况的3D文化系统。用于研究癌症干细胞的3D体外肿瘤模型（肿瘤球体）在该领域已经获得了越来越多的普及（Weiswald等人，2015）。使用基质嵌入或封装的球体，悬滴培养的球体，磁悬浮系统或3D打印方法的系统已经广泛用于研究和新药筛选。在本文中，我们描述了测试shRNA介导的基因沉默对肿瘤球体形成和生长的影响的详细方案。这种方法允许研究人员测试基因敲低对肿瘤起始细胞生长的影响。正如我们实验室所证实的那样，该方案也可用于直接从肿瘤组织中分离3D癌细胞系。
【背景】3D体外肿瘤细胞模型代表了细胞系与体内生长的肿瘤之间的桥接实验方法（Pampaloni等人，2007; ...
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| Obtaining Multi-electrode Array Recordings from Human Induced Pluripotent Stem Cell–Derived Neurons
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Neuronal electrical properties are often aberrant in neurological disorders. Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)-derived neurons represent a useful platform for neurological disease modeling, drug discovery and toxicity screening in vitro. Multi-electrode array (MEA) systems offer a non-invasive and label-free platform to record neuronal evoked-responses concurrently from multiple electrodes. To better detect the neural network changes, we used the Axion Maestro MEA platform to assess neuronal activity and bursting behaviors in hiPSC-derived neuronal cultures. Here we ...
[摘要] 神经元电特性在神经疾病中经常是异常的。 人诱导的多能干细胞（hiPSC）衍生的神经元代表神经疾病建模，药物发现和体外毒性筛选的有用平台。 多电极阵列（MEA）系统提供了一个非侵入性的无标记平台，可同时记录来自多个电极的神经元诱发反应。 为了更好地检测神经网络变化，我们使用了Axion Maestro MEA平台来评估hiPSC衍生的神经元培养物中的神经元活动和爆裂行为。 在这里，我们描述了神经元培养准备，MEA记录和数据分析的详细方案，我们希望这将有益于该领域的其他研究人员。
【背景】人类诱导多能干细胞（hiPSC）技术目前正用于体外模拟神经和精神疾病。最近的研究已经证明，与特定疾病有关的某些细胞表型可以在盘中重现。神经电活动是神经系统功能的本质，代表了正常功能对于情绪，记忆，感觉形态和体内行为至关重要的交流的关键形式。在疾病状况下，电特性可能受到影响，因此了解基于hiPSC的神经疾病模型中的神经元电路连接性，生理学和病理学非常重要。
膜片钳和多电极阵列（MEA）技术是用于评估电生理学活性并由此评估神经元功能的主要技术。尽管膜片钳是研究单个细胞的活性和功能的强大的细胞内方法（Neher等人，1978），MEA平板具有记录细胞外动作电位（或尖峰）的能力，和同一板中数千个不同细胞同时的局部场电位，从而更好地理解网络水平的神经元活动（Hutzler等人，2006; ...
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