|
Author:
Date:
2014-02-05
[Abstract] We describe a water-based optical clearing agent, SeeDB (See Deep Brain), which clears fixed brain samples in a few days without quenching many types of fluorescent dyes, including fluorescent proteins and lipophilic neuronal tracers. SeeDB is a saturated solution of fructose (80.2% w/w) in water with 0.5% α-thioglycerol. In standard SeeDB optical clearing procedure, we treat paraformaldehyde-fixed embryo and brain samples with increasing concentrations of aqueous fructose solutions, and finally equilibrate them in SeeDB. The entire procedure takes approximately three days. Unlike previous ...
[摘要] 我们描述了一种水基光学清除剂，SeeDB（参见深脑），其在几天内清除固定的脑样品，而不淬灭许多类型的荧光染料，包括荧光蛋白和亲脂性神经元示踪剂。 SeeDB是果糖（80.2％w/w）在含有0.5％α-硫代甘油的水中的饱和溶液。在标准的SeeDB光学清除程序中，我们用增加浓度的果糖水溶液处理多聚甲醛固定的胚胎和脑样品，并且最后在SeeDB中平衡它们。整个过程大约需要三天。与以前的方法不同，该方法在清除过程中保持恒定的样品体积，这是保持细胞形态完整的重要因素。光学清除后，我们可以达到>在共聚焦显微镜下为1,000μm。当与双光子显微镜结合时，SeeDB允许我们以毫米级别水平成像固定的小鼠大脑。这种方法有助于全面和定量分析理解神经元电路，在成人和发展中国家的小鼠大脑。还提供了SeeDB变体（参见DB37）和优化的程序（见DBp和SeeDB37ht协议）以满足特定要求。
|