| Heterologous Expression and Purification of SARS-CoV2 Nucleocapsid Protein
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] This protocol describes a step by step method for heterologous expression of SARS-CoV2 Nucleocapsid (N) protein in Escherichia coli. Moreover, this protocol includes steps to purify the N protein to high purity and homogeneity. Thus, purified protein can be used for ligand binding assays and other biochemical experiments.
[摘要] [摘要]该方案描述了一种逐步在大肠杆菌中异源表达SARS-CoV2核衣壳（N）蛋白的方法。此外，该方案包括纯化N蛋白以获得高纯度和均一性的步骤。因此，纯化后的蛋白质可用于配体结合分析和其他生化实验。
[] 自2019年底在中国武汉姆被发现以来，SARS-CoV2感染在世界各地肆虐（Wu等人，2020年）。为了跟踪早期感染的进程，在血清学检测中，核衣壳蛋白（N）与棘突蛋白（S）一起用于监测纽约地区早期感染的进程。N是病毒蛋白中最高表达的一种，因此是一个很好的靶点。为了便于这些分析，我们开发了一个纯化方案，并成功地用于这些研究。
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| Heterologous Expression and Purification of SARS-CoV2 Nucleocapsid Protein
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] This protocol describes a step by step method for heterologous expression of SARS-CoV2 Nucleocapsid (N) protein in Escherichia coli. Moreover, this protocol includes steps to purify the N protein to high purity and homogeneity. Thus, purified protein can be used for ligand binding assays and other biochemical experiments.
[摘要] [摘要]该方案描述了一种逐步在大肠杆菌中异源表达SARS-CoV2核衣壳（N）蛋白的方法。此外，该方案包括纯化N蛋白以获得高纯度和均一性的步骤。因此，纯化后的蛋白质可用于配体结合分析和其他生化实验。
[] 自2019年底在中国武汉姆被发现以来，SARS-CoV2感染在世界各地肆虐（Wu等人，2020年）。为了跟踪早期感染的进程，在血清学检测中，核衣壳蛋白（N）与棘突蛋白（S）一起用于监测纽约地区早期感染的进程。N是病毒蛋白中最高表达的一种，因此是一个很好的靶点。为了便于这些分析，我们开发了一个纯化方案，并成功地用于这些研究。
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| Isolating Multiple Extracellular Vesicles Subsets, Including Exosomes and Membrane Vesicles, from Bovine Milk Using Sodium Citrate and Differential Ultracentrifugation
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Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] Milk is a complex fluid that contains various types of proteins and extracellular vesicles (EVs). Some proteins can mingle with EVs, and interfere with their isolation. Among these proteins, caseins form micelles of a size comparable to milk EVs, and can thus be co-isolated with EVs. Preliminary steps that affect milk are crucial for EV isolation and impact the purity and abundance of isolated EVs. In the course of our previous works on cow’s milk EVs, we found that sodium citrate (1% final), which is a biocompatible reagent capable of breaking down casein micelles into 40-nm monomers, ...
[摘要] [摘要 ] 牛奶是一种复杂的流体，其中包含各种类型的蛋白质和细胞外囊泡（EVs），有些蛋白质会与EV混合在一起，并干扰其分离，在这些蛋白质中，酪蛋白形成的胶束大小与牛奶EV相当因此，可以将其与电动汽车共隔离。影响牛奶的初步步骤对于电动汽车的隔离，影响分离电动汽车的纯度和丰度至关重要。在我们以前对牛奶电动汽车的研究过程中，我们发现柠檬酸钠（最终含量为1％ ）是一种生物相容性试剂，能够将酪蛋白胶束分解为40 nm单体，可分离出大量的EV，而酪蛋白或其他污染蛋白的沉淀率却很低。 EV子集，深入表征其形态，蛋白质含量和小分子RNA富集模式。我们还能够描述其在小鼠肠道炎症模型中的生物学功能。具体来说，是从同一样品中分离出不同乳EV子集的培养基。更具体地说，我们着重介绍了使用柠檬酸钠作为标准化方法来分离和研究乳EV的方法及其在差分超速离心之外的分离技术的潜力。
[背景 ] 在我们以前的出版物（本穆萨等人。，2016 ，2017，2019b和2019c;本穆萨和普罗沃斯特，2019） ，我们强调，牛乳是包含细胞外无数的复杂流体囊泡。（EV）用的子集在这些之中，外泌体是多囊体（MVB）与细胞膜融合时释放的约100 nm囊泡，进行超速离心时，这些沉淀物的离心速度等于或高于100,000 xg （P100K，其中P代表沉淀）（Pieters 等。，2015） ...
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