| Isolation of THY1+ Undifferentiated Spermatogonia from Mouse Postnatal Testes Using Magnetic-activated Cell Sorting (MACS)
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] In mammals, homeostasis of many tissues rely on a subpopulation of cells, referred to as stem cells, to sustain an appropriate number of undifferentiated and differentiated cells. Spermatogonial stem cells (SSCs) provide the fundamental cellular source for spermatogenesis and are responsible for the lifelong maintenance of the germline pool in testes throughout the reproductive lifespan of males. To gain insight into germline stem cell biology and develop strategies for infertility treatment, several germ cell isolation methods have been reported in order to acquire good quality and quantity ...
[摘要] 在哺乳动物中，许多组织的体内平衡依赖于称为干细胞的细胞亚群，以维持适量的未分化细胞和分化细胞。精原细胞干细胞（SSC）为精子发生提供了基本的细胞来源，并且负责终生维持雄性生殖期间睾丸中的种系池。为了获得对种系干细胞生物学的了解并制定不孕症治疗策略，已经报道了几种生殖细胞分离方法，以获得良好质量和数量的未分化精原细胞。其中，磁激活细胞分选（MACS）是一种有效的细胞分离方法，其需要较少的时间和较少的初始细胞数以使用抗原 - 抗体反应来获得富集的细胞群体。胸腺细胞抗原1（THY1，CD90.2）被认为是小鼠新生儿和成年睾丸中未分化精原细胞的表面标志物。在这里，我们描述了一个用于分离来自小鼠睾丸的一周龄THY1 + 细胞和四周龄THY1 + 细胞的方案。分离过程包括三个步骤：睾丸收集和单细胞悬浮，使用生物素缀合的抗THY1抗体的细胞标记和磁性细胞分离。注意，这种隔离方案应在五小时内完成，以最大限度地提高活细胞的质量和数量。
背景 在几个成人组织中观察到活性和静止干细胞的共存。静止，自我更新和分化之间的充分平衡对于维持适当数量的未分化干细胞是必要的，并且避免过早的干细胞耗尽许多组织的体内平衡（Tseng等人，2015; Wabik和Jones，2015; ...
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| Cytology and Microscopy: Immunolocalization of Covalently Modified Histone Marks on Barley Mitotic Chromosomes
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Author:
Date:
2016-06-20
[Abstract] Barley is a diploid inbreeding crop with a genome of 5 GB organized into seven chromosomes. The relatively low chromosome number and their large size make barley an excellent model for chromosome cytogenetic studies of large genome cereal crops. Chromatin can be defined as euchromatin or heterochromatin. Euchromatin is gene-rich, less condensed, and transcriptionally active while the heterochromatin is gene-poor, remains highly condensed and has low transcriptional activity (Bartova et al., 2008; Sharakhov and Sharakhova, 2015). However, the mapping of nine Histone ...
[摘要] 大麦是一种二倍体近亲繁殖作物，基因组为5 GB，组织成7条染色体。相对低的染色体数量及其大小使大麦成为大型基因组谷物作物的染色体细胞遗传学研究的优良模型。染色质可以定义为真核细胞色素或异染色质。现代染色质是富含基因的，较少缩合的和转录活性的，而异染色质是基因缺乏的，保持高度缩合并具有低转录活性（Bartova等人。 Sharakhov和Sharakhova，2015）。然而，九个组蛋白修饰的映射显示，这种简单描述在大麦中不准确。相反，已经显示携带不同共价修饰的组蛋白的组合揭示了将大麦染色体分成三个全球环境的10个染色质状态（Baker等人，2015）。简言之，在该方案中，收集大麦根（cv Morex），在多聚甲醛中固定并压在载玻片上。使用针对特定组蛋白修饰的抗体，特别是H3K27me3，K3K27me1和H3K9me2对染色体涂片进行免疫染色。我们使用共聚焦成像获得堆叠图像，并确认这些组蛋白修饰在大麦染色体的位置。
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