| Total Triglyceride Quantification in Caenorhabditis elegans
|
|
Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] Several studies suggest an important role of lipid metabolism in regulating longevity of Caenorhabditis elegans. Therefore, assays to quantify lipids have enormous value in understanding aging and pathologies associated with it. Approximately 70% of lipid metabolism genes in the nematode have orthologs in humans. Amenability of C. elegans to genetic manipulations has allowed investigations into the role of specific genetic factors in lipid metabolism. Here, we describe a protocol to quantify total triglycerides in C. elegans, which can be extended to studies of the ...
[摘要] [摘要]多项研究表明脂质代谢在调节秀丽隐杆线虫的寿命中具有重要作用。因此，定量脂质的测定在理解衰老和与其相关的病理学方面具有巨大价值。线虫中大约70％的脂质代谢基因在人类中具有直系同源物。秀丽隐杆线虫对基因操作的适应性允许调查特定遗传因素在脂质代谢中的作用。在这里，我们描述了一个协议，以定量总甘油三酯在秀丽隐杆线虫，这CA n可以扩展到环境和遗传因素改变对储存脂肪的影响的研究。该协议量化了整个蠕虫裂解物中甘油三酸酯的皮摩尔。由于测定的敏感性，它可以帮助鉴定总存储脂肪的细微变化，这是显微镜技术无法识别的。
[背景]多余的卡路里通常以三酰基甘油或糖原的形式存储（Cohen，2018年）。甘油三酸酯（TAGs）的异常水平与人类的心脏病，胰腺炎和动脉粥样硬化有关（Cameron等人，1974; Lee等人，2003; Walther和Farese，2012; Onal等人，2017）。TAG被包装到细胞质中的脂滴中。脂质液滴存在于真核细胞中，大小从20 nm到100 µm不等（Stobart等，1986； ...
|
|
|
| A High-throughput Interbacterial Competition Platform
|
|
Author:
Date:
2020-09-05
[Abstract] Contact-dependent interbacterial competition is a common strategy used by bacteria to fight for their ecological niches. Interbacterial competition is monitored by a competition assay involving co-culturing the attacker and the recipient bacterial cells on agar, followed by recovery of the surviving recipient cells. Conventional interbacterial competition assays rely on serial dilution, plate spreading, and colony counting experiments for the readout. The high demand for time and labor in a competition assay limits its use for large-scale screening. However, a high-throughput interbacterial ...
[摘要] [摘要 ] 接触依赖性细菌间竞争是细菌争夺生态位的一种常用策略。通过竞争测定法监测细菌间竞争，该竞争测定法包括在琼脂上共同培养攻击者和受体细菌细胞，然后回收存活的受体细胞。常规的细菌竞争分析需要依靠连续稀释，平板铺展和菌落计数实验来进行读数。竞争测定中对时间和劳力的高需求限制了其在大规模筛选中的用途。然而，需要高通量的细菌间竞争筛选方法来筛选参与细菌间竞争的遗传因素。在这里，使用根癌土壤杆菌作为攻击者， 作为大肠埃希菌，我们开发了一种功能强大，快速，高效和高通量的VI型分泌系统依赖性细菌竞争筛选平台。该系统无需进行连续稀释和铺板即可进行96种同时竞争分析。该系统的数据分析仅依赖于直接和直接的菌落计数。该平台可以很容易地用于识别参与任何依赖接触的细菌竞争系统的新因素。
[背景 ] 细菌已经进化出多种策略来对抗其他细菌以获取生态位适应性，而接触依赖性细菌间竞争是广泛使用的策略之一（Granato 等人，2019）。细菌可以使用其I型（T1SS），IV型（T4SS），V型（T5SS），VI型（T6SS）或VII型（T7SS）分泌系统将蛋白毒素输送到其竞争细胞，受体细胞，并以接触依赖的方式杀死它（Aoki 等人，2005; Hood 等人，2010; Souza 等人，2015; Cao 等人，2016;García-Bayona ...
|
|
|
| Contemporaneous Measurement of Outer and Inner Membrane Permeability in Gram-negative Bacteria
|
|
Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] The emergence and rapid spread of multidrug resistance in bacteria have led to the urgent need for novel antibacterial agents. Membrane permeabilization is the mechanism for many antibacterial molecules that are being developed against gram-negative bacteria. Thus, to determine the efficacy of a potential antibacterial molecule, it is important to assess the change in bacterial membrane permeability after treatment. This study describes the protocol for the assays of outer and inner membrane permeability using the fluorescent probes N-phenyl-1-naphthylamine and propidium iodide. Compared with ...
[摘要] [摘要 ] 细菌中多药耐药性的出现和迅速扩散导致对新型抗菌剂的迫切需求。膜通透性是许多针对革兰氏阴性细菌的抗菌分子的机制。因此，为了确定潜在的抗菌分子的功效，重要的是评估治疗后细菌膜通透性的变化。这项研究描述了使用荧光探针N-苯基-1-萘胺和碘化丙啶测定外膜和内膜通透性的方案。与其他实验（例如电子显微镜和最小杀菌浓度的测定）相比，该方法提供了一种更简单，更快速且经济高效的方法来评估抗菌分子的膜通透性和杀菌功效。这项研究提出了一种相对于传统方案的优化方案，该方案是在与抗菌测定相同的培养条件下，将细菌与抗菌分子一起孵育，然后在不含肉汤和抗菌分子的缓冲液中检测荧光探针的信号。此协议可避免的效果养分缺乏对细菌的生理状态和抗菌molecul的干扰ES 朝向的F luorescent探针。因此，该方法可以有效，准确地评估膜的渗透性，并与从其他抗菌测定法（如最小抑菌浓度和时间杀灭曲线测定法）获得的结果相匹配。
[背景 ] ...
|
|
|