| Expression and Purification of Arabidopsis Transmembrane Protein BCM1 in Saccharomyces cerevisiae
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] Heterologous expression and purification of transmembrane proteins have remained a challenge for decades hampering detailed biochemical and structural characterization of key enzymes and their interacting regulators in multiple metabolic pathways. An in-depth study on the newly identified Arabidopsis thaliana integral membrane protein BALANCE OF CHLOROPHYLL METABOLISM 1 (BCM1) showed a stimulatory effect of the BCM1 on magnesium chelatase, the first enzyme of chlorophyll biosynthesis, through interaction with the GENOMES UNCOUPLED 4 (Wang et al., 2020). Here, we report a ...
[摘要] [摘要 ] 异源表达和公顷跨膜蛋白的纯化VE 仍然几十年来阻碍了关键酶详述生物化学和结构表征一个挑战小号和它们的相互作用调节在多个代谢途径。上新鉴定进行了深入的研究拟南芥拟南芥叶绿素代谢1（BCM1）的整合膜蛋白BALANCE显示一个通过与相互作用对镁螯合，叶绿素生物合成的第一个酶，所述BCM1的刺激效应基因组中脱开4 （王等等人，2020）。这里 ，我们报告了酿酒酵母中His-tagged BCM1异源表达和纯化的详细和优化方法。˚F ollowing这种方法，我们获得用于本机BCM1 体外酶测定的镁螯合（王等人，2020） 。目前，BCM1的结晶研究正在进行中。这个协议可以适于纯化BCM 1一样从用于酶和结构研究真核生物的跨膜蛋白。
[背景 ] 鉴定翻译后单组的lators其指导LY 调制enzym 一个叶绿素合成的酶的抽动活动可以大大提高我们理解的分子机制，通过该植物保持高效叶绿素叶期间LL合成绿化（Brzezowski 等人，2015年）。然而，叶绿素合成酶及其相互作用蛋白的详细生化分析受到体外重组蛋白可用性的限制。我们最近发现一个叶绿素代谢1（BCM1）的翻译后调节平衡，同时刺激小号叶绿素合成和延迟叶绿素分解，日ERE 被授予叶发育过程中的叶绿素稳态（王等人，2020年）。为了检查BCM1对镁螯合酶（MgCh ...
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| Isolation, Culture, and Differentiation of Primary Myoblasts Derived from Muscle Satellite Cells
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The skeletal muscle is key for body mobility and motor performance, but aging and diseases often lead to progressive loss of muscle mass due to wasting or degeneration of muscle cells. Muscle satellite cells (MuSCs) represent a population of tissue stem cells residing in the skeletal muscles and are responsible for homeostatic maintenance and regeneration of skeletal muscles. Growth, injury, and degenerative signals activate MuSCs, which then proliferate (proliferating MuSCs are called myoblasts), differentiate and fuse with existing multinuclear muscle cells (myofibers) to mediate muscle ...
[摘要] [摘要] 骨骼肌是身体活动和运动表现的关键，但是衰老和疾病通常会由于肌肉细胞的浪费或变性而导致肌肉质量的逐步丧失。肌卫星细胞（MuSCs）代表的组织STE群体米细胞小号居住在骨骼肌和负责骨骼肌的体内平衡维持和再生。生长，损伤和变性信号激活MuSC，然后增殖（增殖的MuSC被称为成肌细胞），分化并与现有的多核肌肉细胞（肌纤维）融合，以介导肌肉的生长和修复。在这里，我们描述了从小鼠骨骼肌中分离MuSC的体外实验方案分析。此外，我们提供了有关如何将原代成肌细胞培养和分化成肌管的详细协议，以及用于表征细胞的免疫荧光染色程序。这些方法对于在体外模拟再生肌生成以了解MuSC 的动力学，功能和分子调控至关重要。
[背景] 通过多种细胞功能维持肌肉的动态平衡，对于保持肌肉的完整性至关重要。组织特异性成体干细胞能够在整个生命中连续不断地再生局部组织。在成年骨骼肌中，称为肌肉卫星细胞（MuSC）的干细胞群具有强大的再生能力，这是肌肉动态平衡的关键（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。静态MuSC位于与肌肉纤维并列的基底层下方的壁iche中，负责肌肉的生长和再生（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。
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| Murine Leukemia Virus (MLV)-based Coronavirus Spike-pseudotyped Particle Production and Infection
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Viral pseudotyped particles (pp) are enveloped virus particles, typically derived from retroviruses or rhabdoviruses, that harbor heterologous envelope glycoproteins on their surface and a genome lacking essential genes. These synthetic viral particles are safer surrogates of native viruses and acquire the tropism and host entry pathway characteristics governed by the heterologous envelope glycoprotein used. They have proven to be very useful tools used in research with many applications, such as enabling the study of entry pathways of enveloped viruses and to generate effective gene-delivery ...
[摘要] 病毒假型颗粒（pp）是包膜病毒颗粒，通常来自逆转录病毒或弹状病毒，在其表面上携带异源性包膜糖蛋白和缺乏必需基因的基因组。这些合成的病毒颗粒是天然病毒的更安全的替代品并且获得由所使用的异源性包膜糖蛋白控制的嗜性和宿主进入途径特征。它们已被证明是用于具有许多应用的研究中非常有用的工具，例如使得能够研究包膜病毒的进入途径并产生有效的基因递送载体。它们的产生的基础在于一些病毒如鼠白血病病毒（MLV）的能力，以将其他病毒的包膜糖蛋白掺入假型病毒颗粒中。这些可以被工程化以包含报道基因例如荧光素酶，使得能够在易感细胞的假型粒子感染时定量病毒进入事件。在这里，我们详细说明使用中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）尖峰（S）作为待并入的异源包膜糖蛋白的实例，能够产生基于MLV的假型包装颗粒的方案。我们还描述了这些颗粒如何用于感染易感细胞并通过荧光素酶测定进行定量感染性读数。
关键词：假型颗粒，鼠白血病病毒，包膜糖蛋白，冠状病毒，
[背景] ...
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