| Quantification of Trypanosoma cruzi in Tissue and Trypanosoma cruzi Killing Assay
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Infection with Trypanosoma cruzi causes Chagas disease. The methods provided here allow for the quantification of T. cruzi in the liver, heart, and blood of intraperitoneally-infected mice and analysis of the killing activity of the cells infected with T. cruzi in vitro.
[摘要] 感染克氏锥虫（Trypanosoma cruzi）引起恰加斯病（Chagas disease）。 这里提供的方法允许量化T。 克氏锥虫在感染腹腔的小鼠的肝脏，心脏和血液中分析，并分析克氏锥虫在体外感染的细胞的杀伤活性。
【背景】以慢性心肌病为特征的恰加斯病是由细胞内原生动物寄生虫克氏锥虫感染引起的（Bonney等人，2015年）。拉丁美洲大约有2000万人患有南美锥虫病（里贝罗等人，2012; Flavia Nardy等人，2015），已成为全球性的健康问题由于感染者的迁移（Andrade等人，2014; Garcia等人，2015; Requena-Mendez等人）， 2015年）。已经开发了几种药物，如nifurtimox和benznidazole，用于治疗恰加斯病。然而，这些药物需要服用数月，并有严重的副作用（Viotti et al。，2009）。治疗的主要目的是抑制T。克鲁兹通过血液传播以及防止心力衰竭的发展。因此，定量T的协议。 cruzi 和 T。这里介绍的克鲁兹杀螨试验可能有助于发展南美锥虫病的新型诊断方法和治疗策略。
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| Labelling HaloTag Fusion Proteins with HaloTag Ligand in Living Cells
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] HaloTag has been widely used to label proteins in vitro and in vivo (Los et al., 2008). In this protocol, we describe labelling HaloTag-Cbx fusion proteins by HaloTag ligands for live-cell single-molecule imaging (Zhen et al., 2016).
[摘要] HaloTag已广泛用于体外和体内标记蛋白质（Los et al。，2008）。 在本协议中，我们描述了通过HaloTag配体标记HaloTag-Cbx融合蛋白的活细胞单分子成像（Zhen等，2016）。
【背景】生物体的分子过程本质上是动态的。直接观察活细胞中的分子过程对于定量地了解生物系统的功能至关重要。荧光显微镜和荧光标记的最新进展使得能够可视化活细胞中单个单个分子的轨迹，提供有关动态相互作用和生物分子装配的见解（Kusumi等，2014; Liu等，2015; Tatavosian等， 2015; Cuvier和Fierz，2017）。用荧光团对生物分子进行特异性标记是荧光单分子成像的关键。 HaloTag是可以与活细胞中合成染料偶联的自标记标签蛋白（Los et al。，2008）。反应在活细胞中迅速发生，形成的共价键是特异性的和不可逆的。该技术已被用于研究体内遗传信息流，并测定活体哺乳动物细胞中基因调控的动力学（Liu et al。，2015; Zheng and Lavis，2017）。 Janelia FluorTM染料，如Janelia FluorTM ...
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| Isolation of Mouse Cardiac Neural Crest Cells and Their Differentiation into Smooth Muscle Cells
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Cardiac neural crest cells (CNCCs) originate at the dorsal edge of the neural tube between the otic pit and the caudal edge of the 3rd somite, and migrate into the pharyngeal arches and the heart. We have shown that fibronectin (Fn1) plays an important role in the development of the CNCC by regulating the differentiation of CNCCs into vascular smooth muscle cells around pharyngeal arch arteries (Wang and Astrof, 2016). This protocol describes the isolation of CNCCs from the neural tube and from the caudal pharyngeal arches, and the differentiation of neural crest-derived cells into ...
[摘要] 心脏神经嵴细胞（CNCC）起源于神经管的背部边缘，位于第3个体节的耳穴和尾缘之间，并迁移到咽弓和心脏。 我们已经表明，纤连蛋白（Fn1）通过调节CNCCs到咽弓动脉周围的血管平滑肌细胞的分化，在CNCC的发展中起重要作用（Wang and Astrof，2016）。 该方案描述了CNCC与神经管和尾尾弓的分离，以及神经嵴衍生细胞分化成平滑肌细胞。 该方案从（Newgreen和Murphy，2000; Pfaltzgraff等人，2012）改编。
【背景】以前发表的方案描述了从神经管分离神经嵴细胞。然而，在耳孔和第三体细胞之间的神经管区域中的神经嵴细胞包括有助于许多不同细胞类型的神经嵴细胞群体;例如，迷走神经嵴细胞也来自该区域。在该方案中，我们修改了用于分离心脏神经嵴细胞的常规方法。而不是使用神经管，我们在胚胎期（E）9.5（22-25个体节期）使用尾部咽部弓形区。这是在将心脏神经嵴细胞分化为血管平滑肌细胞之前。神经嵴培养物通常含有污染性间充质细胞，通常表达平滑肌基因。为了鉴定神经嵴衍生细胞，我们从以下交叉产生的胚胎中分离出神经嵴细胞：Fn1flox / flox; ROSAmTmG / mTmG雌性小鼠×Fn1 +/-;Tfap2αIRESCre/ ...
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