| Evaluation of Angiogenesis Inhibitors Using the HUVEC Fibrin Bead Sprouting Assay
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Author:
Date:
2016-10-05
[Abstract] Angiogenesis, the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, is a critical process that occurs during normal development and tumor formation. Targeting tumor angiogenesis by blocking the activity of vascular endothelial growth factor (VEGF) has demonstrated some clinical benefit; nevertheless there is a great need to target additional angiogenic pathways. We have found that the human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) fibrin bead sprouting assay (FBA) is a robust and predictive in vitro assay to evaluate the activity of angiogenesis inhibitors. Here, we describe an ...
[摘要] 血管发生，来自预先存在的血管的新血管的生长是在正常发育和肿瘤形成期间发生的关键过程。通过阻断血管内皮生长因子（VEGF）的活性靶向肿瘤血管生成已经证明了一些临床益处;然而，非常需要靶向额外的血管生成途径。我们已经发现，人脐静脉内皮细胞（HUVEC）纤维蛋白珠发芽测定（FBA）是评估血管生成抑制剂的活性的稳健的和预测性的体外测定。在这里，我们描述了用于评估血管生成的生物抑制剂和关键终点的自动定量的优化的FBA方案。
[背景] 血管发生，新血管的生长从先前存在的血管，是在伤口愈合和正常发育期间发生的生理过程。血管生成是一个复杂和高度调节的过程，涉及内皮细胞增殖，分化，迁移，基质粘附和细胞间的信号的紧密协调。血管发生也严重参与肿瘤发展和转移。事实上，通过阻断血管内皮生长因子（VEGF）的活性靶向肿瘤血管生成已经证明了临床益处。由于肿瘤最终对VEGF靶向治疗产生抗性，因此非常需要靶向额外的血管生成途径。我们已经发现人脐静脉内皮细胞（HUVEC）纤维蛋白珠发芽测定（FBA）（Nakatsu等人，2007; Nakatsu和Hughes，2008; ...
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| Macrophage Polarization by Tumor-induced MDSCs Assay
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Author:
Date:
2016-08-20
[Abstract] Myeloid derived suppressor cells (MDSCs) are a subset of granulocytes (immature myeloid cells) that exploit a variety of mechanism to modulate the innate and adaptive immune system. MDSCs are present normally in the body, but their numbers increase during inflammation and in cancer, promoting an immunosuppressive microenvironment. In addition to MDSCs, macrophages also play an important role during cancer development. There are two subsets of tumor associated macrophages (TAMs): M1 and M2. M1 are “anti-tumor” macrophages that are activated by interferon gamma (IFN-γ) and/or Lipopolysaccharide ...
[摘要] 骨髓衍生的抑制细胞（MDSC）是粒细胞（未成熟骨髓细胞）的子集，其利用多种机制调节先天和适应性免疫系统。 MDSC通常存在于体内，但它们的数量在炎症和癌症期间增加，从而促进免疫抑制微环境。除了MDSC，巨噬细胞也在癌症发展中发挥重要作用。肿瘤相关巨噬细胞（TAM）有两个亚类：M1和M2。 M1是由干扰素γ（IFN-γ）和/或脂多糖（LPS）活化并分泌大量白细胞介素12（IL-12）从而诱导Th1抗肿瘤免疫应答的"抗肿瘤"巨噬细胞。 M2或"致肿瘤发生"巨噬细胞被白介素4（IL-4）和白细胞介素10（IL-10）激活并分泌大量的IL-10，这促进肿瘤进展（Gabrilovich等人， 。，2012）。在肿瘤微环境中MDSC和巨噬细胞之间的相互作用显示增强这些亚群介导的免疫抑制。 MDSC通过产生IL-10而影响TAM，其继而诱导IL-12的下调并将M1极化为M2巨噬细胞。在我们的研究中，我们使用以下方案来评价肿瘤诱导的MDSC将LPS活化的M1极化为M2巨噬细胞的能力（Vences-Catalan等人，2015）。该方案改编自先前的研究（Sinha等人，2007）。
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| Primary Explosive Blast-induced Traumatic Brain Injury Model in PC12 Cell Culture
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Author:
Date:
2016-08-20
[Abstract] While it is understood that structural damage occurs at the cellular level from the traumatic brain injury event, the effect on functional activity remains largely unknown. Simplified models such as in vitro models of primary explosive blast are critically needed to deconvolute mechanisms of cellular damage. This protocol details an in vitro indoor experimental system setup (Zander et al., 2015) using real military explosive charges to more accurately represent battlefield blast exposure, and probe the effects of primary explosive blast on dissociated neurons.
[摘要] 细胞毒性CD8 + T细胞能够通过其T细胞受体（TCR）与主要组织相容性复合物（MHC）分子呈递的小免疫原性肽（抗原）之间的特异性相互作用特异性识别和杀死靶细胞。抗原特异性细胞毒性T细胞的抗原识别能力和体外裂解活性可以在所谓的铬51（<51> Cr）释放测定中功能性评估，其是几乎50年前在我们的机构中发展起来的（Brunner等人，1968年）。放射性标记的内源性抗原呈递缺陷的细胞[例如，用于抗原呈递（TAP）缺陷型T2细胞的转运蛋白]，并用感兴趣的MHC稳定转染（例如 ，HLA-A2 sup + +）通常在这个4小时测定期间用作靶标。或者，内源性呈递免疫原性抗原的Cr标记的病毒感染或肿瘤细胞系可以作为靶细胞（例如，用于评估肿瘤识别）。 在肽滴定测定（部分A）中，用抗原性肽的系列稀释物对放射性标记的靶细胞进行脉冲，并在效应物（例如，CD8 + T细胞克隆）与靶细胞（ Cr-T2细胞）比（E:T）为10:1的混合物在96孔V型底板中37℃温育4小时。在肿瘤杀伤试验（B部分）中，将细胞毒性CD8 ...
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