| Differential Fractionation of Erythrocytes Infected by Plasmodium berghei
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Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] The study of host/pathogen interactions at the cellular level during Plasmodium intra-erythrocytic cycle requires differential extraction techniques aiming to analyze the different compartments of the infected cell. Various protocols have been proposed in the literature to study specific compartments and/or membranes in the infected erythrocyte. The task remains delicate despite the use of enzymes or detergents theoretically capable of degrading specific membranes inside the infected cell.
The remit of this protocol is to propose a method to isolate the erythrocyte cytosol ...
[摘要] [摘要 ] 疟原虫内红细胞周期中细胞水平上宿主/病原体相互作用的研究需要采用差异提取技术来分析感染细胞的不同区室，文献中提出了各种方案来研究特定的区室和/或尽管理论上使用酶或去污剂能够降解被感染细胞内部的特定膜，但这项工作仍然很棘手。
该方案的任务是提出一种通过percoll 梯度从感染细胞的其他区室中分离出红细胞胞浆和鬼影的方法，此外，使用equinatoxin II 裂解红细胞膜的方法已经被证明是更有效的方法。有效的在红细胞裂解不管细胞感染状态，相比常用链球菌溶血素。该虫空泡（PV）的含量收集皂素后，恢复细胞膜和寄生虫胞液蛋白通过的Triton X-100裂解，裂解液由此获得的前通过分析W¯¯ 西部时代印迹以评估各种提取steps.This协议的准确度允许主机室的从寄生虫隔间（PV和寄生虫）的分离，从而导致出口到主机宿主蛋白质的潜力的研究，以及寄生虫蛋白质细胞。
[背景] 本文所介绍的协议是，我们最初发表在一个协议的一个改进的科学报告.The 该协议的最初的目标是执行的表征P. 疟原虫由寄生虫出口到它的主机cell.This蛋白允许的免疫荧光测定法的证实，证实了蛋白质的输出-以及被布雷菲德菌素A 阻断-以及在被感染的红细胞中输出时相互作用蛋白的分析（Gnangnon et al。，2019）。
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| Conditional Knockdown of Proteins Using Auxin-inducible Degron (AID) Fusions in Toxoplasma gondii
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] Toxoplasma gondii is a member of the deadly phylum of protozoan parasites called Apicomplexa. As a model apicomplexan, there is a great wealth of information regarding T. gondii’s 8,000+ protein coding genes including sequence variation, expression, and relative contribution to parasite fitness. However, new tools are needed to functionally investigate hundreds of putative essential protein coding genes. Accordingly, we recently implemented the auxin-inducible degron (AID) system for studying essential proteins in T. gondii. Here we provide a step-by-step protocol ...
[摘要] 弓形虫是原生动物寄生虫称为Apicomplexa致命门的一员。 作为一个复杂的模型，关于T的信息有很多。 gondii的8,000多种蛋白质编码基因，包括序列变异，表达和对寄生虫适应的相对贡献。 然而，需要新的工具来功能性地调查数百个推定的必需蛋白质编码基因。 因此，我们最近实施了生长素诱导降解（AID）系统来研究T中的基本蛋白质。弓形虫。 在这里，我们提供了一个检查蛋白质功能的一步一步的协议。 在组织培养环境中使用AID系统。
【背景】生长素是一类通过靶向某些蛋白质在植物中进行蛋白酶体降解而发出信号的植物激素（Teale等人，2006）。 Kohei Nishimura等人具有将该植物特异性信号传导系统的组分转移到其他真核生物中用于有兴趣的蛋白质（POI）的条件调节，创建生长素诱导降解（AID）系统的聪明想法（Nishimura等人，2009）。这个系统已经被成功地用于几种真核生物，包括疟原虫疟原虫（Kreidenweiss et al。，2013; Philip和Waters，2015）。只需要两个转基因成分来实现这个系统，称为转运抑制剂反应1（TIR1）的植物生长素受体和用AID标记的POI。用生长素（例如，3-吲哚乙酸/ IAA）处理活化SCF ...
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| Investigating Localization of Chimeric Transporter Proteins within Chloroplasts of Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] In this protocol, we describe a method to design chimeric proteins for specific targeting to the inner envelope membrane (IEM) of Arabidopsis chloroplasts and the confirmation of their localization by biochemical analysis. Specific targeting to the chloroplast IEM can be achieved by fusing the protein of interest with a transit peptide and an IEM targeting signal. This protocol makes it possible to investigate the localization of chimeric proteins in chloroplasts using a small number of transgenic plants by using a modified method of chloroplast isolation and fractionation. IEM ...
[摘要] 在这个协议中，我们描述了一种设计嵌合蛋白的方法，用于特异性靶向拟南芥叶绿体的内包膜（IEM）并通过生化分析确定它们的定位。 叶绿体IEM的特异性靶向可通过将感兴趣的蛋白质与转运肽和IEM靶向信号融合来实现。 这个协议使得有可能使用少量的转基因植物，通过使用修改的叶绿体分离和分离方法来研究嵌合蛋白在叶绿体中的定位。 嵌合蛋白的IEM定位可以通过胰蛋白酶消化和碱性提取进一步评估。 在此，称为SbtAII的嵌合碳酸氢根转运蛋白的定位通过使用针对葡萄球菌蛋白A的抗体进行蛋白质印迹来检测。该方案改编自上原等人，2016年
【背景】有人提出将蓝藻CO 2浓度机制整合到叶绿体中是改善C 3+植物光合作用的有希望的方法。 根据理论估计，将BicA和SbtA整合到叶绿体IEM中可以提高光合CO 2固定率。 我们研究了核编码的蓝细菌碳酸氢盐转运蛋白BicA和SbtA与拟南芥叶绿体的IEM的整合。 因此，我们制定了一个协议，设计嵌合构造为特定目标的IEM和调查嵌合蛋白在叶绿体中的定位。
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