| Efficient Agrobacterium-mediated Transformation of the Elite–Indica Rice Variety Komboka
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Author:
Van T. Luu, Melissa Stiebner, Paula Emmerich Maldonado, Sandra Valdés, Didier Marín, Gerardo Delgado, Virginia Laluz, Lin-Bo Wu, Paul Chavarriaga, Joe Tohme, Inez H. Slamet-Loedin and Wolf B. Frommer,
Date:
2020-09-05
[Abstract] Genetic transformation is crucial for both investigating gene functions and for engineering of crops to introduce new traits. Rice (Oryza sativa L.) is an important model in plant research, since it is the staple food for more than half of the world’s population. As a result, numerous transformation methods have been developed for both indica and japonica rice. Since breeders continuously develop new rice varieties, transformation protocols have to be adapted for each new variety. Here we provide an optimized transformation protocol with detailed tips and tricks for ...
[摘要]
[摘要 ] 遗传转化对于研究基因功能和农作物工程引入新性状均至关重要。水稻（Oryza sativa L.）是植物研究中的重要模型，因为它是世界一半以上人口的主食。其结果是，大量的转化方法已经开发了两个籼稻和粳稻米。由于育种者不断开发新的水稻品种，因此必须针对每个新品种适应转化方案。在这里，我们为使用未成熟胚的非洲新品种Komboka 提供了一种优化的转化协议，包括详细的技巧和窍门。在Komboka中，我们使用此优化方案对GUS / GFP报告基因构建体的表观转化率高达48％。该协议也适用于其他优质lite 稻品种。
[背景 ] 为植物的遗传转化的各种方法公顷一直在开发，例如穿孔（Shimamoto PEG介导的原生质体转染。等人，1989;达塔。等人，1992），生物射弹转化（Christou的等人，1991）和农杆菌-介导的转化（Slamet-Loedin 等，2014）。农杆菌介导的转化是将DNA引入植物的最广泛使用的方法之一（van Wordragen and Dons，1992）。该方法已被广泛用于研究，并已成为生物技术的关键先决条件。自从开发新的育种技术（如基因组编辑）以来，它就变得越来越重要（Char ...
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| Quantification of Plant Cell Death by Electrolyte Leakage Assay
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] We describe a protocol to measure the electrolyte leakage from plant tissues, resulting from loss of cell membrane integrity, which is a common definition of cell death. This simple protocol is designed to measure the electrolyte leakage from a tissue sample over a time course, so that the extent of cell death in the tissue can be monitored dynamically. In addition, it is easy to handle many tissue samples in parallel, which allows a high level of biological replication. Although the protocol is exemplified by cell death in Arabidopsis in response to pathogen challenge, it is easily ...
[摘要] 我们描述了测量植物组织中电解质渗漏的方案，其由细胞膜完整性的丧失导致，这是细胞死亡的常见定义。 这个简单的方案设计用于测量组织样本在一段时间内的电解质泄漏，从而可以动态监测组织中细胞死亡的程度。 另外，平行处理许多组织样品很容易，这允许高水平的生物复制。 尽管该方案以响应病原体攻击的拟南芥中的细胞死亡为例，但它很容易应用于其他类型的植物细胞死亡。
【背景】当细胞死亡并丧失细胞膜的完整性时，电解质如K +离子就会从细胞中渗出。因此，我们可以使用组织中泄漏的电解质的量作为组织中细胞死亡程度的代表。量化从组织泄漏的电解质的简单方法是测量含有将死细胞的组织的水的电解电导率的增加。这种电解质渗漏测定法已经应用于植物组织，以评估响应于生物和非生物胁迫而死亡的细胞的相对数量，所述细胞例如病原体攻击，昆虫食草，伤口，UV辐射，氧化应激，盐度，干旱，寒冷和热压力（Demidchik et al。，2014）。
最初的方法被设计成测量含有植物组织的水浴溶液在煮沸之前和之后的电导率，其中煮沸后的电导率被用于使组织尺寸差异标准化（Whitlow等人，1992年）。在这里我们描述了一个程序，通过在多个时间点测量叶片浮在12孔板上的水的电解电导率来动态监测叶盘中的电解质渗漏。可以合理地假设来自相同大小的组织样品的电解质的总量，例如从类似发育阶段的叶子冲出的相同面积的圆盘是相当的，并且没有必要测量电解质电导率之后煮沸组织。我们用细菌病原体，即丁香假单胞菌 ...
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| Use of Geminivirus for Delivery of CRISPR/Cas9 Components to Tobacco by Agro-infiltration
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] CRISPR/Cas9 system is a recently developed genome editing tool, and its power has been demonstrated in many organisms, including some plant species (Wang et al., 2016). In eukaryotes, the Cas9/gRNA complexes target genome sites specifically and cleave them to produce double-strand breaks (DSBs), which can be repaired by non-homologous end joining (NHEJ) pathway (Wang et al., 2016). Since NHEJ is error prone, mutations are thus generated. In plants, delivery of genome editing reagents is still challenging. In this protocol, we detail the procedure of a virus-based gRNA ...
[摘要] CRISPR / Cas9系统是最近开发的基因组编辑工具，其功能已被证实在许多生物体中，包括一些植物物种（Wang等人，2016）。 在真核生物中，Cas9 / gRNA复合物特异性地靶向基因组位点并切割它们以产生双链断裂（DSB），其可以通过非同源末端连接（NHEJ）途径修复（Wang等人， 。，2016）。 由于NHEJ易出错，因此产生突变。 在植物中，基因组编辑试剂的递送仍然是挑战性的。 在本协议中，我们详细介绍了CRISPR / Cas9介导的植物基因组编辑（VIGE）的基于病毒的gRNA传递系统的过程。 该方法提供了将gRNA递送到植物细胞中的快速且有效的方式，特别是对于那些难以转基因农杆菌的方法。
已经报道了基于病毒的基因组编辑技术使用解构DNA病毒和RNA病毒（Baltes等人，2014; Ali等人，2015）。 最近，我们使用了一种完整的双因素病毒 - 卷心菜叶卷曲病毒（CaLCuV）（一种感染广西芥菜科的成员，包括花椰菜的二分酵母病毒），用于高效率 第一次（Yin等人，2015年），其主机之一的基因组编辑（Nicotiana benhamiana）首次进行基因组编辑。
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