Preparation of Cerebellum Granule Neurons from Mouse or Rat Pups and Evaluation of Clostridial Neurotoxin Activity and Their Inhibitors by Western Blot and Immunohistochemistry
|
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Cerebellar Granule Neurons (CGN) from post-natal rodents have been widely used as a model to study neuronal development, physiology and pathology. CGN cultured in vitro maintain the same features displayed in vivo by mature cerebellar granule cells, including the development of a dense neuritic network, neuronal activity, neurotransmitter release and the expression of neuronal protein markers. Moreover, CGN represent a convenient model for the study of Clostridial Neurotoxins (CNT), most notably known as Tetanus and Botulinum neurotoxins, as they abundantly express both CNT ...
[摘要] 来自产后啮齿动物的小脑颗粒神经元(CGN)已被广泛用作研究神经元发育,生理学和病理学的模型。 CGN体外培养维持成熟小脑颗粒细胞在体内显示的相同特征,包括发育致密的神经炎网络,神经元活动,神经递质释放和神经元的表达 蛋白质标记。 此外,CGN代表了梭菌神经毒素(CNT)研究的便利模型,最着名的是破伤风和肉毒杆菌神经毒素,因为它们大量表达CNT受体和神经元内基质, ie ,可溶性N-乙基马来酰亚胺 - 敏感因子激活蛋白受体(SNARE蛋白)。 在这里,我们描述了从出生后大鼠/小鼠获得高纯度CGN培养物的方案和用CNT中毒的简便方法。 我们还说明了评估CNT活性及其抑制的方便方法。
【背景】梭菌神经毒素(CNT)的大家族由破伤风神经毒素(TeNT)和肉毒杆菌神经毒素(BoNT)的多种变体形成,它们分别是破伤风和肉毒中毒的神经麻痹毒素(Schiavo et al。,2000; Johnson和Montecucco,2008; Rossetto et al。,2014)。 TeNT,七种BoNT血清型(BoNT / A至/ G)及其许多亚型是金属蛋白酶,通过切割SNARE蛋白(可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子激活蛋白受体),三种必需蛋白质来阻断神经递质的释放而引起神经麻痹。控制突触小泡与突触前质膜的融合(Rossetto et al。,2014; ...
|
|
High Dimensional Functionomic Analysis of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at a Single Cell Level
|
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] The ability to conduct investigation of cellular transcription, signaling, and function at the single-cell level has opened opportunities to examine heterogeneous populations at unprecedented resolutions. Although methods have been developed to evaluate high-dimensional transcriptomic and proteomic data (relating to cellular mRNA and protein), there has not been a method to evaluate corresponding high-dimensional functionomic data (relating to cellular functions) from single cells. Here, we present a protocol to quantitatively measure the differentiation potentials of single human ...
[摘要] 在单细胞水平进行细胞转录,信号传导和功能调查的能力为以前所未有的决议研究异质人群开启了机会。 尽管已经开发了评估高维转录组学和蛋白质组学数据(与细胞mRNA和蛋白质有关)的方法,但尚未有方法从单个细胞评估相应的高维功能组学数据(与细胞功能有关)。 在这里,我们提出了一种方案来定量测量单个人造血干细胞和祖细胞的分化潜能,然后根据这些测量结果聚集细胞。 细胞电位的高维功能组分析允许细胞功能与相同祖细胞群体内的分子机制相关联。
【背景】单细胞水平的细胞转录,信号传导和功能单细胞测量技术的发展,以及流式细胞仪等先前存在的技术的发展,使得新镜头能够检测复杂的异质群体。这些方法产生大量数据,这可以借助于降维算法来解释,如使用Mpath,Monocole,PCA,Wishbone或扩散图算法在单细胞RNA-Seq上所示的(Paul等, 2016年;参见 et al。,2017),以及使用tSNE或PhenoGraph的CyTOF(Amir et al。,2013; Levine et al 。,2015)。
我们开发了这个协议,以允许在单细胞环境中对造血祖细胞的大规模培养物进行功能分析和随后的降维。在这个协议中,我们描述了在细胞因子的基质细胞培养物中培养人CD34 ...
|
|
Virucidal and Neutralizing Activity Tests for Antiviral Substances and Antibodies
|
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] In a narrow definition, virucidal activity represents the activity by which to interact with and physically disrupt viral particles. In a broad definition, it includes the activity by which to functionally inhibit (neutralize) viral infectivity without apparent morphological alterations of the viral particles. The viral infectivity can be measured in cell culture system by means of plaque assay, infectious focus assay, 50% tissue culture infectious dose (TCID50) assay, etc. Morphologically, disruption of viral particles can be demonstrated by negative staining electron ...
[摘要] 在狭义定义中,杀病毒活性表示与病毒颗粒相互作用和物理破坏的活性。 在一个广义的定义中,它包括了功能上抑制(中和)病毒感染性而没有病毒颗粒的明显形态改变的活性。 可以通过噬菌斑测定,感染性聚焦测定,50%组织培养感染剂量(TCID 50)测定,等等在细胞培养系统中测量病毒感染性。 形态学上,病毒颗粒的破坏可以通过病毒颗粒的负染色电子显微镜分析来证明。 在这篇文章中,我们描述了用广义定义评估杀病毒活性的方法。
【背景】病毒是细胞内寄生虫,它们劫持宿主细胞机制来复制它们自己的基因组。在病毒生命周期的最初阶段,感染性病毒颗粒附着(结合)到靶细胞表面上的称为病毒受体的特定宿主蛋白,然后病毒渗透(内化和/或融合)到细胞的细胞内区室宿主细胞,其中病毒生命周期的后续步骤继续产生后代病毒体(Scheel和Rice,2013)。
狭义定义中的杀病毒活性表示与病毒颗粒相互作用和物理破坏的活性。在一个广义的定义中,它包括与病毒感染性相互作用并在功能上抑制(中和)病毒感染性而没有病毒颗粒的明显形态改变的活性,如抗体介导的中和的情况。
最近我们报道了从蛇毒(Chen等,2017)获得的分泌型磷脂酶Aβ的异构体和来自蝎毒(El-Bitar ...
|
|