| Multiple Stepwise Gene Knockout Using CRISPR/Cas9 in Escherichia coli
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] With the recent implementation of the CRISPR/Cas9 technology as a standard tool for genome editing, laboratories all over the world are undergoing one of the biggest advancements in molecular biology since PCR. The key advantage of this method is its simplicity and universal applicability for species of any phylum. Of particular interest is the extensively studied Gram-negative bacterium Escherichia coli, as it is considered as the workhorse for both research and industrial purposes. Here, we present a simple, robust and effective protocol using the CRISPR/Cas9 system in combination ...
[摘要] 随着CRISPR / Cas9技术作为基因组编辑的标准工具的最近实施，全世界的实验室正在经历PCR以来分子生物学方面最大的进步之一。这种方法的关键优点是其简单和普遍适用于任何物种的门。特别感兴趣的是广泛研究的革兰氏阴性细菌大肠杆菌，因为它被认为是研究和工业用途的主力。在这里，我们提出了一个简单，强大和有效的协议，使用CRISPR / Cas9系统结合λ红色基因敲除机器。大肠杆菌。在我们的程序中最重要的是使用双链供体DNA和固化策略来去除导向RNA编码质粒，其允许在仅仅两个工作日后开始新的突变。我们的方案允许多个具有高诱变效率的基因敲除株，适用于高通量的方法。
【背景】革兰氏阴性细菌大肠杆菌是生物技术工程中最重要的生物之一。已在能源，农业，食品生产，生物技术，医药等不同行业的各种流程中成功实施。由于不断的技术进步，生物技术部门正在迅速发展。特别是，CRISPR / Cas9技术可能是PCR（分子）生物学最大的革命（Ledford，2015）。简而言之，CRISPR / Cas9保护细菌免受诸如质粒和病毒等侵入性遗传因子的影响（Marraffini，2015）。利用这种从原核生物获得的免疫系统，已经开发了基于CRISPR / Cas9系统的基因组编辑的非常有力的工具（Jinek等人，2012）。
CRISPR / ...
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| Biomechanical Characterization of Onion Epidermal Cell Walls
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Here we describe two experimental protocols to measure the biomechanical properties of primary (growing) plant cell walls, with a focus on analyzing cell wall epidermal strips of onion scales. The first protocol measures cell wall creep (time-dependent irreversible extension) under constant force. Such creep is often mediated by the wall-loosening action of expansin or selective endoglucanases. The second protocol is based on two consecutive stretches of the wall and measures the wall’s elastic and plastic compliances, which depend on cell wall structure. These two assays provide ...
[摘要] 在这里，我们描述了两个实验协议来衡量的主要（成长）植物细胞壁的生物力学性能，重点是分析洋葱鳞片的细胞壁表皮带。 第一个协议测量细胞壁蠕变（时间依赖的不可逆扩展）在恒定的力量下。 这种蠕变通常由膨胀素或选择性内切葡聚糖酶的壁松弛作用介导。 第二种方案是基于两个连续的壁延伸并测量壁的弹性和塑性顺从性，这取决于细胞壁结构。 这两个测定提供了可能与细胞壁结构和细胞膨胀生长相关的补充信息。
【背景】生长的植物细胞的主壁足够强以抵抗由细胞膨压产生的张力，但由于扩展蛋白或其它不可逆细胞壁增大所必需的催化剂的选择性松动作用，细胞生长期间可能不可逆地膨胀（Cosgrove， 2016a和2016b）。细胞壁力学性质（如弹性和可塑性）的评估对于理解细胞壁结构及其在生长（细胞增大）和生长停止后的改变是重要的。墙体力学的一个重要测量方法是基于单轴拉伸试验，如我们在测量弹性和塑性柔量（柔量是模量的倒数;模量是刚度的度量）的应力/应变试验中所述。另一种互补测定法是基于不可逆的，随时间增长的长度（蠕变），其在原始细胞壁中发生，当它们保持恒定的张力并且被内源性膨胀素或外源内切葡聚糖酶持续松弛时（Durachko和Cosgrove，2009; Cosgrove ，2011; ...
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