Isolation, Purification and Characterization of Exosomes from Fibroblast Cultures of Skeletal Muscle
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Author:
Date:
2020-04-05
[Abstract] Exosomes are dynamic nanovesicles secreted by virtually all cells and are present in all biological fluids. Given their highly heterogeneous content exosomes have been implicated in many physiological and pathological processes that they exert by influencing cell-cell and cell-ECM communication. In recent years an increasing number of methods have been established for the purification and characterization of exosomes. These include ultracentrifugation, ultrafiltration, size exclusion chromatography, immune capture and precipitation using a proprietary polymer. Here, we provide a protocol ...
[摘要] [摘要 ] 外来体是几乎所有细胞分泌的动态纳米囊泡,并存在于所有生物体液中。鉴于它们的异质含量很高,外泌体已牵涉到它们通过影响细胞-细胞和细胞-ECM通讯而发挥的许多生理和病理过程。近年来,已经建立了越来越多的方法外泌体的纯化和表征。其中包括超速离心,超滤,尺寸排阻色谱,免疫捕获和使用专有聚合物的沉淀。在这里,我们提供了基于差分超速离心和蔗糖密度梯度的协议,该协议专门用于从成年小鼠骨骼肌衍生的原代成纤维细胞培养物中分离粗制和超纯外泌体。可以对该协议进行修改和修改,以从各种组织和体液中分离和表征外泌体。
背景 ] ë xosomes是单膜,异质纳米囊泡直径范围从30至150nm,secre 由所有细胞和存在于几乎所有的体液泰德。外泌体中存在的可溶性和膜大分子,mRNA,microRNA的光谱取决于代谢状态以及分泌这些纳米囊泡的细胞的发育起源。由于它们的货物组成,外泌体可以启动接收细胞中的信号传导途径,并参与了发育,免疫和正常组织生理的维持。在神经退行性疾病,纤维化和癌症等疾病条件下,它们被证明可以触发和传播病理刺激(Rackov 等,2018; Gurunathan 等,2019; van de Vlekkert 等,2019)。在这里,我们描述了从成年小鼠腓肠肌(GA)肌肉建立的成纤维细胞培养物中纯化外泌体的方案(van de Vlekkert ...
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Isolation of Primary Human Skeletal Muscle Cells
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Primary myoblast culture is a valuable tool in research of muscle disease, pathophysiology, and pharmacology. This protocol describes techniques for dissociation of cells from human skeletal muscle biopsies and enrichment for a highly myogenic population by fluorescence-activated cell sorting (FACS). We also describe methods for assessing myogenicity and population expansion for subsequent in vitro study.
[摘要] 原代成肌细胞培养是研究肌肉疾病,病理生理学和药理学的有用工具。 该协议描述了通过荧光激活细胞分选(FACS)从人类骨骼肌活检中分离细胞并富集高度肌原细胞的技术。 我们还描述了用于评估随后的体外研究中肌原性和群体扩张的方法。 【背景】来自肌肉活组织检查的原代人成肌细胞是模拟体外人体肌肉疾病的有价值的资源。成肌细胞增殖,分化和融合的改变是许多神经肌肉疾病所共有的特征,并且可以用于测定基于细胞的和药理学的治疗。人类骨骼肌活组织检查,尤其是那些受疾病影响的人,通常含有大量的非肌原细胞,如脂肪细胞和成纤维细胞。因此,纯化肌原细胞进行骨骼肌发育和疾病的体外研究是非常重要的。肌肉疾病的早期研究涉及使用组织外植体或未纯化的分离细胞(Geiger和Garvin,1957; Herrmann等人,1960; Goyle等人,1967; Bishop 1971年),后来,Blau和Webster引入了一种预先电镀技术去除成纤维细胞(Blau and ...
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