| Real-time Three-dimensional Tracking of Endocytic Vesicles
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Author:
Date:
2020-10-20
[Abstract] Endocytic trafficking and recycling are fundamental cellular processes that control essential functions such as signaling protein complexes transport and membrane identity. The small GTPase Rabs are indispensable component of the endosomal recycling machinery. The Rabs bind to effectors to mediate their functions, such as protein sorting and degradation, membrane tethering or lipid modification, and organelle motility. Due to the complex and dynamic nature of endosomal compartments and tracking route, detailed multiparametric analyses of three-dimensional data by quantitative methods are ...
[摘要] [摘要]内吞运输和再循环是基本的细胞过程，它们控制诸如信号蛋白复合物运输和膜特性等基本功能。小GTPase-Rabs是内质体回收机械中不可缺少的组成部分。Rabs结合效应器介导其功能，如蛋白质的分类和降解，膜栓系或脂质修饰，以及细胞器的运动。由于内体隔室和追踪路线的复杂性和动态性，用定量方法对三维数据进行详细的多参数分析是一项具有挑战性的工作。在这里，我们描述了一个详细的延时成像协议，设计用于定量跟踪单个内囊泡，使用GFP-Rab4阳性循环内体。这种方法允许在三维活体细胞成像中自动跟踪单个内吞小泡，允许研究多个参数，如丰度、速度、方向性、亚细胞定位以及蛋白质共定位。该协议可广泛应用于各种环境下的细胞模型，包括生长因子刺激、基因敲除、药物治疗等，适用于高通量筛选。
[背景] 越来越多的证据强调了在细胞迁移、粘附、形态发生、增殖、胞质分裂以及学习和记忆等不同过程中协调的内质体再循环的重要性（Grant和Donaldson，2009年；Parachoniak和Park，2012年；Wandinger Ness和Zerial，2014年；Zaoui等人，2019a和2019b）. 哺乳动物中有70多种Rab-gtpase，它们在膜转运中具有不同的定位和功能。更复杂的是，虽然大多数Rab-gtpase是普遍存在的，但有些表现出组织特异性表达（van der ...
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| Ciliary Assembly/Disassembly Assay in Non-transformed Cell Lines
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] The primary cilium is a non-motile sensory organelle whose assembly and disassembly are closely associated with cell cycle progression. The primary cilium is elongated from the basal body in quiescent cells and is resorbed as the cells re-enter the cell cycle. Dysregulation of ciliary dynamics has been linked with ciliopathies and other human diseases. The in vitro serum-stimulated ciliary assembly/disassembly assay has gained popularity in addressing the functions of the protein-of-interest in ciliary dynamics. Here, we describe a well-tested protocol for transfecting human retinal ...
[摘要] 主要纤毛是一种非运动感觉细胞器，其装配和拆卸与细胞周期进程密切相关。 初级纤毛在静止细胞中从基体拉长并随着细胞重新进入细胞周期而被吸收。 睫状动力失调与纤毛病和其他人类疾病有关。 体外血清刺激的睫状体装配/分解测定已经在解决睫状动力学中感兴趣的蛋白质的功能方面受到欢迎。 在这里，我们描述了转染人视网膜色素上皮细胞（RPE-1）和对转染细胞进行睫状体装配/分解测定的充分测试的方案。
【背景】初级纤毛是毛发样感觉细胞器，其在G 0 / G 1期出现，并且在细胞周期的S期之前分解（Tucker等， et al。，1979）。先前的研究已经证实，某些未转化的细胞类型（即，甚至是RPE-1细胞，3T3成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞[MEFs]）可以被饿死以诱导静止和睫状体形成。随后的血清再次添加触发双相睫状体吸收，其在刺激后2小时和24小时达到峰值（Tucker等人，1979; Li等人，2011） 。该现象为文献中常用的血清刺激的睫状体组装/分解测定奠定了基础，以鉴定参与睫状体组装和拆卸的蛋白质（Pugacheva等人，2007; ...
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