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Author:
Date:
2011-10-20
[Abstract] This protocol differs from other procedures in that the bacterial culture is grown at 18 °C rather than the conventional 37 °C. Otherwise, the protocol is unremarkable and follows a fairly standard course. Why growing the cells at low temperature should affect the efficiency of transformation is unknown. Perhaps the composition or the physical characteristics of bacterial membranes synthesized at 18 °C are more favorable for uptake of DNA, or perhaps the phases of the growth cycle that favor efficient transformation are extended. Incubating bacterial cultures at 18 °C is a challenge. Most ...
[摘要] 本方法与其他实验操作的不同之处在于细菌培养是在18°C 而不是传统的37°C。否则本方法就不值一提，并遵循一个相当标准的过程。为何低温细胞生长会影响转化效率仍是未知。也许18°C合成的细菌膜的成分或物理特性更有利于DNA的摄取，或者有利于高效转化的生长周期阶段延长了。18°C孵育细菌培养基是一个挑战。大多数实验室没有一个在夏季和冬季可以准确地保持温度为18°C的摇床。一种解决方案是将孵化器放置在4℃冷室，并使用温度控制器来加热孵化器至18℃。另外，如果菌液生长在20-23℃几乎没有效率的损失，这是许多实验室的环境温度。在这些温度下菌液孵育培养生长缓慢，倍增时间为2.??5至4h。为了避免后期在夜间达到所需的OD，在晚上建立培养并在第二天早晨早点收菌。这种方法在许多常用分子克隆的大肠杆菌（E. coli）菌株上运作良好 包括XL1-Blue, DH1, JM103, JM108/9, DH5a, 以及 HB101。
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