| Measurement of Oxygen Consumption Rate (OCR) and Extracellular Acidification Rate (ECAR) in Culture Cells for Assessment of the Energy Metabolism
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Mammalian cells generate ATP by mitochondrial (oxidative phosphorylation) and non-mitochondrial (glycolysis) metabolism. Cancer cells are known to reprogram their metabolism using different strategies to meet energetic and anabolic needs (Koppenol et al., 2011; Zheng, 2012). Additionally, each cancer tissue has its own individual metabolic features. Mitochondria not only play a key role in energy metabolism but also in cell cycle regulation of cells. Therefore, mitochondria have emerged as a potential target for anticancer therapy since they are structurally and functionally ...
[摘要] 哺乳动物细胞通过线粒体（氧化磷酸化）和非线粒体（糖酵解）代谢产生ATP。已知癌细胞使用不同的策略重新编程它们的代谢以满足能量和合成代谢需要（Koppenol等人，2011; Zheng，2012）。此外，每个癌症组织都有其自己的个体代谢特征。线粒体不仅在能量代谢中起关键作用，而且在细胞的细胞周期调控中也起关键作用。因此，线粒体作为抗癌治疗的潜在靶标已经出现，因为它们在结构和功能上与其非癌对应物不同（D'Souza等人，2011）。我们详细介绍了利用海马XF24细胞外通量分析仪（图1）测量活细胞中氧耗率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）测量的方案。 Seahorse XF24细胞外通量分析仪持续测量细胞上清液中的氧浓度和质子流量（Wu等人，2007）。这些测量结果在OCR和ECAR值中转换，并能够直接定量线粒体呼吸和糖酵解。有了这个协议，我们试图评估三种不同癌细胞系的基线粒体功能和线粒体应激反应细胞毒性测试先导化合物甲磺卡西林，以研究其作用机制。将细胞铺在XF24细胞培养板中并保持24小时。在分析之前，将培养基替换为无缓冲的DMEM pH7.4，然后使细胞在非代谢通量分析前使用Seahorse XF在非CO 2孵育器中平衡以允许精确测量Milli-pH单位改变。 ...
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| Intra-amniotic Injection of Mouse Embryos
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Recent outbreaks of infectious neuro-developmental diseases such as congenital Zika syndrome - have led to a demand for prognosis data from animal models. We developed an intra-amniotic injection mice model that allows Zika virus (ZIKV) infected mice to grow to puberty. In this system, ZIKV is injected into the amniotic fluid of pregnant mice and infected embryos thereafter. ZIKV-infected mice show several symptoms of clinical ‘congenital Zika syndrome’, including decreased brain volume and mis-laminated retina. We also evaluated several behavioral functions of these ZIKV-infected mice, for ...
[摘要] 最近爆发的传染性神经发育疾病，例如先天性寨卡综合征 - 已经导致对来自动物模型的预后数据的需求。 我们开发了羊膜内注射小鼠模型，其允许寨卡病毒（ZIKV）感染的小鼠生长至青春期。 在此系统中，ZIKV被注入怀孕小鼠的羊水中，然后感染胚胎。 ZIKV感染的小鼠显示出临床'先天性Zika综合征'的几种症状，包括脑容积减少和视网膜错层。 我们还评估了这些ZIKV感染小鼠的几种行为功能，例如，在小鼠到达青春期后，它们具有视觉和运动缺陷。 这种技术可用于筛选和评估候选药物，并有助于评估感染性神经发育疾病的预后。
【背景】自第一例人感染ZIKV病例以来，已有60多年的历史，但2007年仅记录了14例ZIKV感染的人类病例。 预后数据远远落后于2015年最近爆发的ZIKV。有证据表明小鼠模型可能对预后研究有效，因为之前的报道证明ZIKV在小鼠中的神经毒性。 因此，ZIKV感染的各种方法包括静脉注射，腹腔注射，足垫注射和脑注射已被用于研究胚胎期或婴儿期期间个体的先天性寨卡综合征。 这里给出的羊膜内注射模型具有两个有利的特征。 首先，可以使用野生型小鼠（C57 BL / 6J），并且研究不限于具有免疫缺陷的小鼠。 其次，ZIKV感染的小鼠可长成青春期，这对试图评估预后的研究是有益的。
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