| Analysing Temporal Dynamics of T Cell Division in vivo Using Ki67 and BrdU Co-labelling by Flow Cytometry
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] This protocol was developed to increase the richness of information available from in vivo T cell proliferation studies. DNA labelling techniques such as BrdU incorporation allow precise control of label administration and withdrawal, so that the division history of a population can be tracked in detail over long timeframes (days-weeks). Ki67 is expressed in the nucleus of dividing cells, and is retained for a short time (3-4 days) after division (Gossel et al., 2017); therefore acting as a molecular clock to identify cells that have recently divided. Combining these two ...
[摘要] 该协议的开发是为了增加从体内T细胞增殖研究中获得的信息的丰富性。 诸如BrdU掺入的DNA标记技术允许精确控制标记施用和撤回，从而可以在很长时间段（日 - 周）内详细地追踪群体的分裂历史。 Ki67在分裂细胞的细胞核中表达，并在分裂后短时间（3-4天）保留（Gossel等人，2017）。 因此充当分子时钟来识别最近分裂的细胞。 将这两种技术结合起来就可以整合来自个体细胞的当前和历史扩散信息。 这个数据随后可以用来通过拟合增殖的数学模型来探测种群动态（Gossel et al。，2017）。
【背景】量化T细胞死亡和分裂的动力学是一个重大的实验和计算挑战，但是这个信息对于我们理解一个健康的免疫系统如何发展和维持至关重要。 T细胞群体动态的体内分析有多种技术，但数据的解释是复杂的，结果可能是模型依赖的（Asquith et al。2002 ; De Boer和Perelson，2013）。许多这些分析基于流式细胞仪读数，通过利用多参数分析的潜力提供获得新颖见解的机会。 BrdU吸收与Ki67表达一起的分析结合是特别有用的，因为每个代表细胞分裂的独特参数。 BrdU是掺入分裂细胞DNA中的胸苷类似物，因此永久标记在标记期间已分裂的细胞（Tough和Sprent，1994; ...
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| Generation of Busulfan Chimeric Mice for the Analysis of T Cell Population Dynamics
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] This protocol was developed to generate chimeric mice in which T lymphocytes could be stratified by age on the basis of congenic marker expression. The conditioning drug busulfan is used to ablate host haematopoietic stem cells while leaving the peripheral immune system intact. Busulfan treatment is followed by bone marrow transplantation (BMT), with T-cell depleted donor bone marrow bearing a different congenic marker (CD45.2) to that of the host mouse (CD45.1). New cell production post-BMT can thus be tracked by measuring the fraction of CD45.2+ cells over time within a ...
[摘要] 该方案被开发用于生成嵌合小鼠，其中T淋巴细胞可以根据同基因标志物表达的年龄进行分层。 白藜芦醇调理药物用于消融宿主造血干细胞，同时使外周免疫系统保持完整。 接受白消安治疗的是骨髓移植（BMT），T细胞耗竭的供体骨髓携带与宿主小鼠（CD45.1）不同的同基因标记（CD45.2）。 因此可以通过在感兴趣的群体内随时间测量CD45.2 +细胞的比例来追踪新的细胞生成后BMT（Hogan等人，2015; Gossel ，2017）。
【背景】骨髓嵌合体是研究免疫系统发育和功能的有价值的工具。典型地，通过照射宿主小鼠然后用供体骨髓移植产生嵌合体。辐射对造血系统造成相当大的损害，并且完全免疫重建在移植后延迟数周至数月（Fry和Mackall，2005）。由此产生的淋巴细胞减少期促使幼稚T细胞的自发性增殖和获得类似记忆的表型（Goldrath等人，2004）。为了避免辐射引起的免疫稳态的紊乱，我们把注意力转向调理药物白消安。白消安是一种烷化剂，对造血干细胞（HSC）有毒性，但不会耗竭循环淋巴细胞（Westerhof等人，2000; Hsieh等人，2007） 。在白消安调理和骨髓移植（BMT）之后，嵌合体与未处理的对照没有区别：它们具有正常数量的幼稚和记忆CD4和CD8T细胞，并且这些细胞表达增殖标记Ki67的正常水平（Hogan等人。，2015; Gossel ...
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