| Molecular and Phenotypic Characterization Following RNAi Mediated Knockdown in Drosophila
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Loss of function studies shed significant light on the involvement of a gene or gene product in different cellular processes. Short hairpin RNA (shRNA) mediated RNA interference (RNAi) is a classical yet straightforward technique frequently used to knock down a gene for assessing its function. Similar perturbations in gene expression can be achieved by siRNA, microRNA, or CRISPR-Cas9 methods also. In Drosophila genetics, the UAS-GAL4 system is utilized to express RNAi and make ubiquitous and tissue-specific knockdowns possible. The UAS-GAL4 system borrows genetic components of S. cerevisiae, ...
[摘要] [摘要]功能丧失的研究为基因或基因产物在不同细胞过程中的参与提供了重要启示。短发夹RNA（shRNA）介导的RNA干扰（RNAi）是一种经典而直接的技术，经常用于敲低基因以评估其功能。也可以通过siRNA，microRNA或CRISPR-Cas9方法实现类似的基因表达扰动。在果蝇遗传学中，UAS-GAL4系统用于表达RNAi，并使遍在和组织特异性的基因敲除成为可能。UAS-GAL4系统借鉴了酿酒酵母的遗传成分，因此排除了系统意外表达的可能性。特别地，该技术使用靶标特异性shRNA，并且其表达受上游激活序列（UAS）支配。由特定启动子调节的GAL4受控表达可以普遍或以组织特异性方式驱动干扰RNA的表达。通过RNA分离和半定量RT-PCR反应，然后进行琼脂糖凝胶电泳来测量敲低效率。我们还采用了免疫染色程序来评估击倒效率。
RNAi为研究人员提供了降低基因产物水平（相当于亚同型条件）并研究结果的选择。基于UAS-GAL4的RNAi方法提供了基因表达的时空调节，还有助于推断早期发育阶段所需的基因功能。
[背景]果蝇果蝇（果蝇）是在研究实验室经常使用的一种通用模式生物。果蝇易于处理，繁殖和维护。而且，精心制作却寿命短，繁殖力高的果蝇具有更多的优势。果蝇遗传学工具的易用性有助于发展对基因功能的全面了解。由于果蝇基因中有60％与人类基因同源，并且具有前面提到的其他优点，因此果蝇是研究体内基因功能的显而易见的模型生物。 ...
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| Efficient Transient Gene Knock-down in Tobacco Plants Using Carbon Nanocarriers
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Gene knock-down in plants is a useful approach to study genotype-phenotype relationships, render disease resistance to crops, and enable efficient biosynthesis of molecules in plants. Small interfering RNA (siRNA)-mediated gene silencing is one of the most common ways to achieve gene knock-down in plants. Traditionally, siRNA is delivered into intact plant cells by coding the siRNA sequences into DNA vectors, which are then delivered through viral and/or bacterial methods. In this protocol, we provide an alternative direct delivery method of siRNA molecules into intact plant cells for ...
[摘要] [摘要]植物基因敲低是研究基因型与表型关系，提高作物对病害的抵抗力以及实现植物分子高效生物合成的有用方法。小干扰RNA（siRNA）介导的基因沉默是在植物中实现基因敲低的最常见方法之一。传统上，通过将siRNA序列编码到DNA载体中，将siRNA传递到完整的植物细胞中，然后通过病毒和/或细菌方法传递。在这个协议中，我们提供的siRNA分子的替代直接递送方法为完整的植物细胞的高效瞬时根Ë击倒在模型的烟草植物，烟草本塞姆氏烟草，叶子。我们的方法使用一维碳基纳米材料，单壁碳纳米管（SWNTs）来传递siRNA，而不依赖于病毒/细菌的传递。我们方法的独特优势在于：i ）不需要对siRNA序列进行DNA编码； ii）与非生物方法相比，这种非生物方法可在更广泛的植物物种中起作用，并且iii）使用非生物递送时，调节并发症更少方法，其中基因沉默是瞬时的，而无需对植物基因组进行永久性修饰。
图形摘要：
图形抽象标题
[背景技术[ 0002 ]在1990年代初，植物研究人员研究矮牵牛花的着色发现了通过RNA干扰（RNAi）引起的基因沉默（Van der ...
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| Immunoprecipitation of Tri-methylated Capped RNA
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Cellular quiescence (also known as G0 arrest) is characterized by reduced DNA replication, increased autophagy, and increased expression of cyclin-dependent kinase p27Kip1. Quiescence is essential for wound healing, organ regeneration, and preventing neoplasia. Previous findings indicate that microRNAs (miRNAs) play an important role in regulating cellular quiescence. Our recent publication demonstrated the existence of an alternative miRNA biogenesis pathway in primary human foreskin fibroblast (HFF) cells during quiescence. Indeed, we have identified a group of ...
[摘要] 蜂窝静止（因此已知为G <子> 0 骤停）是由降低的DNA复制，增加自噬表征，并且增加的细胞周期蛋白依赖性激酶p27蛋白上标kip1 表达。静止对伤口愈合，器官再生和瘤形成是必不可少的。先前的发现表明微小RNA（miRNA）在调节细胞静止过程中起重要作用。我们最近的出版物静止期间以实例阐述在原代人替代miRNA生物途径包皮成纤维（HFF）细胞的存在。实际上，我们已经发现了一组与由trimethylguanosine合酶1（TGS1）蛋白的2,2,7- trimethylguanosine（TMG）带肩改性PRI-的miRNA（其成熟miRNA发现静止期期间诱导的）的并运输到细胞质通过Exportin-1（XPO1）蛋白质。我们用来抗体针对（TMG）兴趣盖（不与第（m交叉反应 7 G）兴趣帽了大部分PRI-的miRNA或mRNA的含有[鲁曼等人的，1982]），以从增殖或静态HFFS的总RNA提取RNA进行免疫沉淀。该测定的新颖性是PRI-miRNA的以及含有一个TMG-帽修改以外的非编码RNA的特异性分离。
【背景】蜂窝静止，类型可逆生长停滞的，是在伤口愈合，器官再生，和预防瘤形成涉及一种重要的细胞状态（科勒，2011;瓦尔古等人 2012）。已发现小的非编码RNA如miRNA参与细胞静止的调节。 ...
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