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Sodium dodecyl sulfate

公司名称: Bio-Rad Laboratories
产品编号: 161-0302
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Reconstitution of Chromatin by Stepwise Salt Dialysis
Author:
Date:
2021-04-05
[Abstract]  

Chromatin, rather than plain DNA, is the natural substrate of the molecular machines that mediate DNA-directed processes in the nucleus. Chromatin can be reconstituted in vitro by using different methodologies. The salt dialysis method yields chromatin that consists of purified histones and DNA. This biochemically pure chromatin is well-suited for a wide range of applications. Here, we describe simple and straightforward protocols for the reconstitution of chromatin by stepwise salt dialysis and the analysis of the chromatin by the micrococcal nuclease (MNase) digestion assay. Chromatin that

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[摘要]  [摘要]染色质而不是普通的DNA是介导细胞核中DNA定向过程的分子机器的天然底物。染色质可以重新构建d体外b ÿ使用不同的方法。盐渗析法产生的染色质由纯化的组蛋白和DNA组成。这种生物化学纯的染色质非常适合广泛的应用。在这里,我们描述了通过逐步盐透析和通过微球菌核酸酶(MNase)消化测定法对染色质进行分析的染色质重构的简单明了的协议。该复原用该方法染色质,可用于高效同源定向修复(HDR)介导的基因编辑编 使用CRISPR-Cas9系统,以及用于染色质动力学和功能的生化研究。


[背景]真核细胞中的DNA被组织成染色质。因此,理想情况下,DNA定向过程的分析(例如复制,重组,修复和转录)将使用染色质模板而不是纯DNA进行(Kadonaga,2019)。为此,染色质可通过使用ATP依赖性或ATP依赖性方法在体外从纯化的成分中重建(有关综述,请参见Lusser和Kadonaga,2004年)。

在这里,我们描述了染色质重建的特定方法,该方法在我们利用CRISPR-Cas9系统对细胞进行HDR介导的基因编辑研究中采用了(Cruz-Becerra和Kadonaga,2020年)。在这项工作中,我们发现相对于普通的(裸)DNA供体模板,通过使用染色质供体模板可以增强精确的HDR介导的DNA插入。我们还将这种方法用于染色质的生化分析,包括高迁移性N组(HMGN)蛋白(Rattner等,2009),染色质动力学(Torigoe等,2013),前核小体(Fei)的表征。等人,2015年),以及核小体失稳因子(NDF)(F ...

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