Costar^® 1.7 mL Low Binding Snap Cap Microcentrifuge Tube, Polypropylene, Nonsterile

公司名称: Corning

产品编号: 3207

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Zaneta Matuszek and Tao Pan

Published online: 2019-03-20

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Purification of RNA Mango Tagged Native RNA-protein Complexes from Cellular Extracts Using TO1-Desthiobiotin Fluorophore Ligand

Author:

Shanker Shyam Sundhar Panchapakesan, Sunny C. Y. Jeng and Peter J. Unrau,

Date:

2018-04-05

[Abstract] A native purification strategy using RNA Mango for RNA based purification of RNA-protein complexes is described. The RNA Mango aptamer is first genetically engineered into the RNA of interest. RNA Mango containing complexes obtained from cleared cellular native extracts are then immobilized onto TO1-Desthiobiotin saturated streptavidin agarose beads. The beads are washed to remove non-specific complexes and then the RNA Mango containing complexes are eluted by the addition of free biotin to the beads. Since the eluted complexes are native and fluorescent, a second purification step such as ... [摘要] 描述了使用RNA Mango进行RNA-蛋白质复合物的RNA纯化的天然纯化策略。 RNA芒果适体首先被基因工程改造成感兴趣的RNA。然后将从清除的细胞天然提取物获得的含有RNA复合物的复合物固定在TO1-Desthiobiotin饱和的链霉亲和素琼脂糖珠上。洗涤珠粒以去除非特异性复合物，然后通过向珠粒中加入游离生物素来洗脱含RNA芒果的复合物。由于洗脱的复合物是天然的和荧光的，所以可以容易地添加第二纯化步骤如尺寸排阻色谱，并且通过监测荧光追踪纯化的复合物。通过这种两步纯化策略产生的高纯度天然复合物可以用于进一步的生物化学表征。

【背景】目前的RNA标签受限于诸如差K ，大尺寸，潜在的生物学干扰或缺乏固有荧光的限制（Panchapakesan等人， 2015年）。 RNA芒果很小，可以简单地整合到茎环结构中，特别是GNRA tetraloops中，它具有生物耐受性，并且最重要的是对其噻唑橙基（TO1）配体TO1-Desthiobiotin（TO1-Dtb）具有高亲和力。 ...

A Quick and Easy Method for Making Competent Escherichia coli Cells for Transformation Using Rubidium Chloride

Author:

Nidhi Sharma, M. Ximena Anleu Gil and Diego Wengier,

Date:

2017-11-05

[Abstract] This protocol describes a quick and efficient method to make competent E. coli cells for transformation using rubidium chloride. Commercial competent cells are expensive and this protocol provides a cheaper alternative to them. [摘要] 这个协议描述了一个快速有效的方法来做出胜任的E。使用氯化铷转化大肠杆菌细胞。商业感受态细胞是昂贵的，这个协议提供了一个更便宜的选择。

【背景】基因克隆的成功高度依赖于细菌细胞的转化效率。通过用化学物质或电脉冲处理细胞可以人为地提高效率。有几个协议可用于准备主管的E。然而，它们通常是长期的，费力的，并且在能力上表现出不一致。 Green和Rogers（2013）的方案克服了这些缺点，并允许制备高感受态细胞（〜10 6 -10 8 CFU /μgDNA）。虽然其他协议要求细胞在低温（19-22°C）下生长，但该协议涉及在37°C下生长细胞。因此，与18-24小时相比，细胞生长更快并且在4小时内达到对数期。该协议是高度可重复的。

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