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Paraformaldehyde

公司名称: Delta Microscopie
产品编号: 15710
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The RiboPuromycylation Method (RPM): an Immunofluorescence Technique to Map Translation Sites at the Sub-cellular Level
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract]  While isotopic labeling of amino acids remains the reference method in the field for quantifying translation rate, it does not provide any information on spatial localization of translation sites. The rationale behind developing the ribopuromycylation method (RPM) was primarily to map translation sites at the sub-cellular level while avoiding detection of newly synthesized proteins released from ribosomes. RPM visualizes actively translating ribosomes in cells via standard immunofluorescence microscopy in fixed and permeabilized cells using a puromycin-specific monoclonal antibody to detect ... [摘要]  尽管氨基酸的同位素标记仍然是用于定量翻译速率的领域中的参考方法,但是其不提供关于翻译位点的空间定位的任何信息。 开发ribopuromycylation方法(RPM)的基本原理主要是在亚细胞水平上绘制翻译位点,同时避免检测从核糖体释放的新合成的蛋白质。 RPM通过使用嘌呤霉素特异性单克隆抗体的固定的和透化的细胞中的标准免疫荧光显微镜可视化主动翻译细胞中的核糖体以检测捕获在用链延长抑制剂处理的核糖体上的嘌呤化新生链。

【背景】几十年来,氨基酸的同位素标记被认为是研究蛋白质翻译的金标准。虽然这种方法已被证明是非常准确的评估翻译率,它没有提供翻译核糖体的位置信息。最近,氨基酸类似物使荧光检测新生链(Dieterich等人,2007)。然而,几乎所有检测到的信号都来自核糖体释放的多肽。我们最初的想法是开发一种方法来标记新生链,同时还束缚于翻译核糖体。

嘌呤霉素(PMY)是一种氨基糖苷类抗生素,模拟带电荷的tRNA Tyr并掺入核糖体A位点。因此,PMY通过核糖体催化 - ...

Determining Ribosome Translational Status by Ribo-ELISA
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract]  The Ribo-ELISA was originally developed to elucidate the basis for the ribopuromycylation method (RPM)-based detection of ribosome bound nascent chains. The Ribo-ELISA enables characterization of the translational status of ribosomes, and can be applied to the discovery of super-ribosomal complexes with novel ribosome associated macromolecules that are isolated by physical fractionation in sucrose gradients or other methods. [摘要]  Ribo-ELISA最初是为阐明基于核糖核苷酸化方法(RPM)的核糖体结合新生链检测的基础而开发的。 Ribo-ELISA能够表征核糖体的翻译状态,并且可以应用于通过蔗糖梯度中的物理分离或其他方法分离的新型核糖体相关大分子的超核糖体复合物的发现。

【背景】核糖体是由40S和60S亚单位组成的异构结构,当多个核糖体与单个mRNA结合时,它们以单体和多核糖体存在于细胞中。 另外,翻译核糖体可以与调节翻译的多个分子复合物相关联。 核糖体ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)能够通过核糖体相关新生链的体外嘌呤化检测翻译核糖体(David等人,2012)。 在将嘌呤霉素添加至具有结合的新生链的核糖体时,这种化学反应自发进行。 该方法定量测定每个核糖体中出现的新生链的数量,并且可以用于确定单核细胞相对于多核糖体的翻译状态,并鉴定结合其他大分子的核糖体,其改变其在沉淀柱中的沉降速率或迁移。

Notch Ligand Binding Assay Using Flow Cytometry
Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract]  Notch signaling is an evolutionarily conserved signaling pathway that plays an indispensable role during development, and in the maintenance of homeostatic processes, in a wide variety of tissues (Kopan, 2012; Hori et al., 2013). The multifaceted roles of Notch signaling are stringently regulated at different levels. One of the most important aspects of regulation is the binding of different Notch ligands to each Notch receptor (NOTCH1-NOTCH4). Canonical ligands Delta or Serrate (in Drosophila), and Delta-like (DLL1 and DLL4) or Jagged (JAG1 and JAG2) (in mammals), are ... [摘要]  Notch信号传导是进化上保守的信号传导途径,在发育过程中以及在各种组织中维持体内平衡过程中起着不可或缺的作用(Kopan,2012; Hori等人,2013)。 Notch信号的多方面作用在不同的层面上受到严格的调控。监管的最重要的方面之一是不同Notch配体与各Notch受体(NOTCH1-NOTCH4)的结合。典型的配体Delta或Serrate(在果蝇中)和Delta样(DLL1和DLL4)或Jagged(JAG1和JAG2)(在哺乳动物中)是跨膜糖蛋白。在一个细胞上表达的配体结合相邻细胞上的Notch受体以诱导Notch信号传导。通过O-岩藻糖和O-GlcNAc聚糖对Notch受体细胞外结构域的糖基化作为Notch信号强度的关键调节剂已经得到很好的确立(Stanley and Okajima,2010; Haltom and Jafar-Nejad,2015; Sawaguchi et al。 >,2017)。为了表征Notch配体与分离细胞中的Notch受体的结合,我们利用人Fc区在C端标记的Notch配体胞外结构域,并通过流式细胞术确定荧光抗Fc抗体的结合。
【背景】众所周知,细胞增殖,分化和凋亡受Notch信号调节。 ...

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