| Isolation, Purification and Characterization of Exosomes from Fibroblast Cultures of Skeletal Muscle
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Author:
Date:
2020-04-05
[Abstract] Exosomes are dynamic nanovesicles secreted by virtually all cells and are present in all biological fluids. Given their highly heterogeneous content exosomes have been implicated in many physiological and pathological processes that they exert by influencing cell-cell and cell-ECM communication. In recent years an increasing number of methods have been established for the purification and characterization of exosomes. These include ultracentrifugation, ultrafiltration, size exclusion chromatography, immune capture and precipitation using a proprietary polymer. Here, we provide a protocol ...
[摘要] [摘要 ] 外来体是几乎所有细胞分泌的动态纳米囊泡，并存在于所有生物体液中。鉴于它们的异质含量很高，外泌体已牵涉到它们通过影响细胞-细胞和细胞-ECM通讯而发挥的许多生理和病理过程。近年来，已经建立了越来越多的方法外泌体的纯化和表征。其中包括超速离心，超滤，尺寸排阻色谱，免疫捕获和使用专有聚合物的沉淀。在这里，我们提供了基于差分超速离心和蔗糖密度梯度的协议，该协议专门用于从成年小鼠骨骼肌衍生的原代成纤维细胞培养物中分离粗制和超纯外泌体。可以对该协议进行修改和修改，以从各种组织和体液中分离和表征外泌体。
背景 ] ë xosomes是单膜，异质纳米囊泡直径范围从30至150nm，secre 由所有细胞和存在于几乎所有的体液泰德。外泌体中存在的可溶性和膜大分子，mRNA，microRNA的光谱取决于代谢状态以及分泌这些纳米囊泡的细胞的发育起源。由于它们的货物组成，外泌体可以启动接收细胞中的信号传导途径，并参与了发育，免疫和正常组织生理的维持。在神经退行性疾病，纤维化和癌症等疾病条件下，它们被证明可以触发和传播病理刺激（Rackov 等，2018; Gurunathan 等，2019; van de Vlekkert 等，2019）。在这里，我们描述了从成年小鼠腓肠肌（GA）肌肉建立的成纤维细胞培养物中纯化外泌体的方案（van de Vlekkert ...
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| Preparation of Cerebellum Granule Neurons from Mouse or Rat Pups and Evaluation of Clostridial Neurotoxin Activity and Their Inhibitors by Western Blot and Immunohistochemistry
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Date:
2018-07-05
[Abstract] Cerebellar Granule Neurons (CGN) from post-natal rodents have been widely used as a model to study neuronal development, physiology and pathology. CGN cultured in vitro maintain the same features displayed in vivo by mature cerebellar granule cells, including the development of a dense neuritic network, neuronal activity, neurotransmitter release and the expression of neuronal protein markers. Moreover, CGN represent a convenient model for the study of Clostridial Neurotoxins (CNT), most notably known as Tetanus and Botulinum neurotoxins, as they abundantly express both CNT ...
[摘要] 来自产后啮齿动物的小脑颗粒神经元（CGN）已被广泛用作研究神经元发育，生理学和病理学的模型。 CGN体外培养维持成熟小脑颗粒细胞在体内显示的相同特征，包括发育致密的神经炎网络，神经元活动，神经递质释放和神经元的表达 蛋白质标记。 此外，CGN代表了梭菌神经毒素（CNT）研究的便利模型，最着名的是破伤风和肉毒杆菌神经毒素，因为它们大量表达CNT受体和神经元内基质， ie ，可溶性N-乙基马来酰亚胺 - 敏感因子激活蛋白受体（SNARE蛋白）。 在这里，我们描述了从出生后大鼠/小鼠获得高纯度CGN培养物的方案和用CNT中毒的简便方法。 我们还说明了评估CNT活性及其抑制的方便方法。
【背景】梭菌神经毒素（CNT）的大家族由破伤风神经毒素（TeNT）和肉毒杆菌神经毒素（BoNT）的多种变体形成，它们分别是破伤风和肉毒中毒的神经麻痹毒素（Schiavo et al。，2000; Johnson和Montecucco，2008; Rossetto et al。，2014）。 TeNT，七种BoNT血清型（BoNT / A至/ G）及其许多亚型是金属蛋白酶，通过切割SNARE蛋白（可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子激活蛋白受体），三种必需蛋白质来阻断神经递质的释放而引起神经麻痹。控制突触小泡与突触前质膜的融合（Rossetto et al。，2014; ...
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| Ex vivo Analysis of Lipolysis in Human Subcutaneous Adipose Tissue Explants
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Most studies of human adipose tissue (AT) metabolism and functionality have been performed in vitro on isolated mature adipocyte or in situ using the microdialysis technique (Lafontan, 2012). However, these approaches have several limitations. The use of mature isolated adipocytes is limiting as adipocytes are not in their physiological environment and the collagenase digestion process could affect both adipocyte survival and functionality. While metabolic studies using microdialysis have brought the advantage of studying the lipolytic response of the adipose tissue in situ ...
[摘要] 人脂肪组织（AT）代谢的上havebeen执行的大多数研究和功能的体外上分离的脂肪细胞成熟或原位使用微透析技术（Lafontan，2012）。但是，这些方法有几个限制。成熟的分离的脂肪细胞的使用是有限的，因为脂肪细胞不在其生理环境中，胶原酶消化过程可能影响脂肪细胞的存活和功能。虽然微透析代谢研究带来了学习原位脂肪组织中的的脂肪分解反应的优点的它仅提供定性的措施，但并没有给出不同的脂肪组织细胞成分的贡献的任何信息。此外，可以在受试者中同时使用的微透析探针的数量是有限的，并且可以受到局部血流量变化和微透析样品的分子大小截断的影响。在这里，我们提出了一个协议，以评估对脂肪组织的功能的体外在AT植允许脂肪组织的研究中其整个范围内，几个小时。此外，可以评估脂肪分解的细胞特异性影响。直接在脂肪组织基质血管室。在脂肪组织中（Gao等人，2016）。
【背景】人类白色脂肪组织（WAT）在体内能量平衡中起主要作用。脂肪细胞是表达特异性脂质处理代谢活动的特化细胞，构成超过90％的WAT体积（Lafontan，2012）。除了脂肪细胞，其他细胞类型是人类WAT中存在的例如，血管细胞，免疫细胞（淋巴细胞和巨噬细胞）和祖细胞在WAT重构和更新参与。脂肪细胞的代谢活动受到局部和全身途径整合的严格控制。在合成代谢或分解代谢条件影响调制的净脂肪细胞的代谢活性神经体液信号， I.E. ...
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