Examining Autophagy in Plant by Transmission Electron Microscopy (TEM)
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] In plants, macroautophagy, here referred as autophagy, is a degradation pathway during which the double-membrane structure named autophagosome engulfs the cargo and then fuses with vacuole for material recycling.
To investigate the process of autophagy, transmission electron microscopy (TEM) was used to monitor the ultrastructure of autophagic structures and identify the cargo during this process due to its high resolution. Compared to other autophagy examination methods including biochemical assays and confocal microscopy, TEM is the only method that indicates the morphology of ...
[摘要] 在植物中,巨自噬,这里称为自噬,是一种降解途径,在此期间,称为自噬体的双膜结构吞噬货物,然后与液泡融合以进行材料回收。
为了研究自噬过程,透射电子显微镜(TEM)用于监测自噬结构的超微结构,并由于其高分辨率在此过程中识别货物。 与其他自噬检测方法(包括生化检测和共聚焦显微镜)相比,TEM是唯一能够显示纳米级自噬结构形态的方法,被认为是阐明自噬中间体形态和自噬基质的最佳方法之一。。 在这里,我们描述了使用TEM在 Nicotiana benthamiana >叶细胞中的自噬检测分析。
【背景】自噬是真核生物中高度保守的大分子降解途径(Dikic,2017)。在植物中,自噬是由几种胁迫条件诱导的,包括饥饿,氧化应激,盐胁迫和衰老(Doelling et al。>,2002; Hanaoka et al。>,2002; Liu et al。>,2005; Bassham,2007; Liu and Bassham,2009; Luo et al。>,2017)。在自噬期间,称为自噬体的双膜囊泡在细胞质中形成并转运到中央液泡中,其中自噬体的外膜与液泡膜融合。然后被称为自噬体的单膜结构进入液泡腔并最终降解(Ohsumi,2001; Liu和Bassham,2012)。
到目前为止,已经建立了许多检测植物自噬的方法。常用的检测方法是共聚焦显微镜,电子显微镜和生化方法。至于共聚焦显微镜检测,自噬标记包括与荧光蛋白融合的ATG8,ATG5和SH3P2用于标记自噬相关结构(Zhuang ...
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Rapid IFM Dissection for Visualizing Fluorescently Tagged Sarcomeric Proteins
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Sarcomeres, the smallest contractile unit of muscles, are arguably the most impressive actomyosin structure. Yet a complete understanding of sarcomere formation and maintenance is missing. The Drosophila indirect flight muscle (IFM) has proven to be a very valuable model to study sarcomeres. Here, we present a protocol for the rapid dissection of IFM and analysis of sarcomeres using fluorescently tagged proteins.
[摘要] 肌肉最小的收缩单位肌肉,可以说是最令人印象深刻的肌动球蛋白结构。 然而,缺少对肌节形成和维护的完整理解。 果蝇间接飞行肌肉(IFM)已被证明是研究肌节的一个非常有价值的模型。 在这里,我们提出了快速解剖IFM和使用荧光标记的蛋白质分析肌节的协议。
【背景】能够使横纹肌纤维收缩的细胞骨架结构是数以百计的称为肌原纤维的电缆。肌原纤维又是一系列连续排列的肌节,全部同时收缩。肌节是完美对称的结构,包含收缩所需的所有元素。在肌节的中心位置是M-线,其中肌球蛋白粗丝被锚定。在肌小节的侧面是Z-盘,其中肌动蛋白细丝被锚定。 肌营养不良是导致进行性骨骼肌无力的遗传性疾病(Schröder和Schoser,2009)。对于肌营养不良症,目前尚无法治愈,可能是由于对肌营养不良症基础的分子机制的不完全理解(Olive et al。,2013)。黑腹果蝇是一种有效的遗传模式生物,由于其生命周期短,经济的维护和丰富的可利用资源而被用于研究肌肉生物学(Hales等人,2015; Wangler等,等人,2015年)。
在果蝇中的飞行由间接飞行肌肉(IFM)(苍蝇中最大的肌肉)的同步动作驱动,后者被进一步细分为背纵肌(DLM)和背腹肌(DVM)。 ...
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