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Millex-GV Filter, 0.22 µm

公司名称: EMD Millipore
产品编号: SLGV004SL
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Proximal Ligation Assay (PLA) on Lung Tissue and Cultured Macrophages to Demonstrate Protein-protein Interaction
Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract]  In this protocol, we describe proximal ligation assay (PLA), an antibody-based detection method for protein-protein interaction. This method relies on specific binding of individual primary antibodies to the two putative interacting proteins. The primary antibodies need to have different hosts. The secondary antibodies against the two hosts have complementary oligonucleotide moieties attached to them. If the two antigens are in close proximity (presumably interacting with each other), the complementary oligonucleotides can anneal and fluorescent nucleotides can be incorporated in a single DNA ... [摘要]  在这个协议中,我们描述近端连接测定(PLA),一种基于抗体的蛋白质相互作用检测方法。 这种方法依赖于个别一抗与两个推定的相互作用蛋白的特异性结合。 一抗需要有不同的宿主。 针对两种宿主的二抗具有与其连接的互补的寡核苷酸部分。 如果两种抗原紧密接近(推测彼此相互作用),则互补的寡核苷酸可以退火,并且荧光核苷酸可以并入单个DNA聚合步骤中。 在显微镜下,这些反应表现为点状荧光斑点,表明成功的PLA反应并提示两种抗原之间的蛋白质 - 蛋白质相互作用。

【背景】近端连接测定法(PLA)是基于抗体的技术,以确定两种蛋白质是否彼此具有40nm。以这种方式检测到的蛋白质可以通过荧光来识别(Ho等人,2012; Banerjee等人,2015)。这使得PLA成为定位蛋白质 - 蛋白质相互作用的极好工具。 Toll样受体(TLR)途径的激活是致病性威胁的先天性免疫应答的重要组成部分。 TLR识别病原体相关分子并诱导信号级联以实现对感染的快速响应。 TLR2和TLR4是TLR家族的两个研究得非常好的成员,它们对不同的刺激有反应。尽管两种受体都响应细菌感染而激活,但只有TLR4响应脂多糖暴露。它们激活一些共享的信号级联,但包括MyD88 / Traf6通路。该途径的诱导包括形成被称为myddosome的信号复合物(Gay等人,2011; Xiong等人,2011; ...

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