| Mechanical Tissue Compression and Whole-mount Imaging at Single Cell Resolution for Developing Murine Epididymal Tubules
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Cells inside the body are subjected to various mechanical stress, such as stretch or compression provided by surrounding cells, shear stresses by blood or lymph flows, and normal stresses by luminal liquids. Force loading to the biological tissues is a fundamental method to better understand cellular responses to such mechanical stimuli. There have been many studies on compression or stretch experiments that target culture cells attached to a flexible extensible material including polydimethylsiloxane (PDMS); however, the know-how of those targeting to tissues is still incomplete. Here we ...
[摘要] [摘要 ] 细胞我n侧主体经受各种机械应力，例如通过管腔液体拉伸或通过血液或淋巴周围细胞的剪切应力提供的压缩流，并且正常的应力。力加载到生物组织上是一种基本方法，可以更好地了解细胞对此类机械刺激的反应。关于压缩或拉伸实验，已有许多研究针对以附着于包括聚二甲基硅氧烷（PDMS）在内的柔性可扩展材料的培养细胞为目标的研究。然而，知道的-如何与靶向组织仍然是不完整的。 在这里，我们以开发小鼠附睾为例，介绍用于机械组织压缩和基于图像的分析的协议。我们显示了一系列步骤，包括从鼠胚胎中解剖组织，使用手动设备进行基于水凝胶的压缩方法以及无损容积组织成像。该协议对于定量和探索组织水平的生物机械反应系统很有用。
[背景 ] 细胞可以对机械刺激作出反应通过细胞内的生物化学信号传导途径。已知这种细胞机械反应在诸如胚胎发育，再生，组织稳态和癌症转移的各种生物过程中起着基本作用（Mammoto 等，2013； Humphrey 等，2014； Vining和Mooney，2017）。最近有关向细胞外部施加力的实验表明细胞如何对给定的机械刺激作出反应。例如，已显示出拉伸或压缩附着在诸如聚二甲基硅氧烷（PDMS）之类的柔性有机硅基材上的细胞单层会触发机械敏感离子通道蛋白Piezo1，从而引起各种细胞行为，例如细胞分裂和挤压，从而导致体内稳态的细胞数量增加。组织（Eisenhoffer ...
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| Live Imaging of Axonal Transport in the Motor Neurons of Drosophila Larvae
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Author:
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2017-12-05
[Abstract] Axonal transport, which is composed of microtubules, motor proteins and a variety of types of cargo, is a prominent feature of neurons. Monitoring these molecular dynamics is important to understand the biological processes of neurons as well as neurodegenerative disorders that are associated with axonal dysfunction. Here, we describe a protocol for monitoring the axonal transport of motor neurons in Drosophila larvae using inverted fluorescence microscopy.
[摘要] 由微管，运动蛋白和各种类型的货物组成的轴突运输是神经元的突出特征。 监测这些分子动力学对于了解神经元的生物过程以及与轴突功能障碍相关的神经退行性疾病是重要的。 在这里，我们描述了使用倒置荧光显微镜监测果蝇幼虫中运动神经元的轴突运输的协议。
【背景】轴突是一种独特的神经元结构，神经元通过该结构将电信号和化学信号传递给邻近的神经元，肌肉和其他组织。通过囊泡，细胞器和材料的循环流动或穿梭来维持轴突功能（Liu等人，2012; Wong等人，2012; Alami等人，2014）。轴突功能障碍被认为是神经退行性病变的早期征兆，并且是人类中阿尔茨海默病，帕金森病和运动神经元疾病等神经退行性疾病的原因（Hirokawa等人，2010; Millecamps and Julien，2013）。然而，在人类和哺乳动物模型中难以监测这些神经退行性疾病中的轴突变性过程。果蝇模型是研究分子遗传水平的神经退行性疾病的有力工具，并通过体内神经元的实时成像为治疗方法提供了重要的证据（Shiba-福岛等人，2014; Hosaka等人，2017）。直立荧光显微镜技术通常用于分析组织和器官培养物的活体成像。然而，由于其广泛的实用性和可扩展性，倒置荧光显微镜已经看到需求增加。在这里，我们介绍我们的协议来分析使用倒置荧光显微镜的果蝇的第三龄幼虫的运动神经元的轴突运输。
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| Rapid IFM Dissection for Visualizing Fluorescently Tagged Sarcomeric Proteins
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Sarcomeres, the smallest contractile unit of muscles, are arguably the most impressive actomyosin structure. Yet a complete understanding of sarcomere formation and maintenance is missing. The Drosophila indirect flight muscle (IFM) has proven to be a very valuable model to study sarcomeres. Here, we present a protocol for the rapid dissection of IFM and analysis of sarcomeres using fluorescently tagged proteins.
[摘要] 肌肉最小的收缩单位肌肉，可以说是最令人印象深刻的肌动球蛋白结构。 然而，缺少对肌节形成和维护的完整理解。 果蝇间接飞行肌肉（IFM）已被证明是研究肌节的一个非常有价值的模型。 在这里，我们提出了快速解剖IFM和使用荧光标记的蛋白质分析肌节的协议。
【背景】能够使横纹肌纤维收缩的细胞骨架结构是数以百计的称为肌原纤维的电缆。肌原纤维又是一系列连续排列的肌节，全部同时收缩。肌节是完美对称的结构，包含收缩所需的所有元素。在肌节的中心位置是M-线，其中肌球蛋白粗丝被锚定。在肌小节的侧面是Z-盘，其中肌动蛋白细丝被锚定。
肌营养不良是导致进行性骨骼肌无力的遗传性疾病（Schröder和Schoser，2009）。对于肌营养不良症，目前尚无法治愈，可能是由于对肌营养不良症基础的分子机制的不完全理解（Olive et al。，2013）。黑腹果蝇是一种有效的遗传模式生物，由于其生命周期短，经济的维护和丰富的可利用资源而被用于研究肌肉生物学（Hales等人，2015; Wangler等，等人，2015年）。
在果蝇中的飞行由间接飞行肌肉（IFM）（苍蝇中最大的肌肉）的同步动作驱动，后者被进一步细分为背纵肌（DLM）和背腹肌（DVM）。 ...
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