| Immunofluorescence Analysis of Human Endocervical Tissue Explants Infected with Neisseria gonorrhoeae
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Colonization and penetration of the epithelium is the infection-initiating route of mucosal pathogens. The epithelium counteracts infection by eliciting host cell responses while maintaining the mucosal barrier function. The obligate human sexually transmitted bacterium Neisseria gonorrhoeae, or gonococcus (GC) infects the female reproductive tract primarily from the endocervical epithelium. Due to lack of an infection model that mimics all aspects of human infections in the female reproductive tract, GC pathogenesis is poorly understood. This protocol takes advantage of the ...
[摘要] 上皮的定植和穿透是粘膜病原体的感染启动途径。 上皮细胞通过引发宿主细胞应答来抵抗感染，同时维持粘膜屏障功能。 专性人类性传播细菌淋病奈瑟氏球菌或淋球菌属（GC）主要从宫颈内膜上皮感染女性生殖道。 由于缺乏模仿女性生殖道人类感染的各个方面的感染模型，GC发病机制知之甚少。 该方案利用培养物中繁殖的人宫颈组织的生存力和功能完整性来产生体外感染模型。 这种组织模型保持了感染目标和环境的性质，而没有任何操作，如病毒永生化上皮细胞。 使用免疫荧光显微镜，分析GC与子宫颈上皮细胞的相互作用。
【背景】淋病奈瑟菌（GC）感染人类生殖器上皮，引起淋病，一种常见的性传播感染。女性感染可导致严重的并发症，如盆腔炎，引起输卵管瘢痕和堵塞，易发生异位妊娠或不孕。由于抗生素耐药菌株的流行率增加，淋病又成为重要的公共卫生问题。由于人类是GC的唯一宿主，因此缺乏模仿人类感染各个方面的感染模型是推进我们对GC发病机理的理解的主要障碍。我们建立了人宫颈组织外植体模型和免疫荧光显微镜分析来检测GC感染妇女GC感染的主要部位人间宫颈细胞的机制。这种体外模型保持了宫颈上皮细胞的正常细胞构筑和组织完整性。使用这种模型和免疫荧光分析，我们表明，气相色氨酸定居和渗透到子宫颈组织，在那里他们可能导致症状和播散性淋球菌感染。 ...
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| Primary Culture System for Germ Cells from Caenorhabditis elegans Tumorous Germline Mutants
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] The Caenorhabditis elegans germ line is an important model system for the study of germ stem cells. Wild-type C. elegans germ cells are syncytial and therefore cannot be isolated in in vitro cultures. In contrast, the germ cells from tumorous mutants can be fully cellularized and isolated intact from the mutant animals. Here we describe a detailed protocol for the isolation of germ cells from tumorous mutants that allows the germ cells to be maintained for extended periods in an in vitro primary culture. This protocol has been adapted from Chaudhari et al. ...
[摘要] 秀丽隐杆线虫种系是胚芽干细胞研究的重要模型系统。 野生型C。 线虫生殖细胞是合胞体，因此不能在体外培养中分离。 相比之下，来自肿瘤突变体的生殖细胞可以完全被细胞化并从突变动物中完整分离。 在这里，我们描述了从肿瘤突变体中分离生殖细胞的详细方案，其允许生殖细胞在体外原代培养中长时间维持。 该协议已从2016年Chaudhari等人改编。
【背景】秀丽生殖细胞在位于两个性腺臂的远端区域的两个成体干细胞龛中产生（Hansen和Schedl，2013; Kimble和Seidel，2013）。在野生型雌雄同体中，有丝分裂生殖细胞仅限于性腺臂的远端，干细胞生态位。野生型生殖细胞是合胞体，并且包含延伸通过性腺臂中心区域的共同细胞质的开口。 ℃。线虫肿瘤种系突变体在整个性腺中增加了生殖细胞的有丝分裂增殖。我们发现肿瘤种系突变体通常具有完整的细胞生殖细胞，其含有完整的质膜（Chaudhari等人，2016）。这种细胞化允许生殖细胞的分离及其在培养中的维持。该方案描述了分离和维持培养物中肿瘤突变体的生殖细胞的方法学和组织培养基。虽然已经描述了用于C的主要培养物的培养基。 elegans 胚胎和幼虫细胞（Strange等人，2007; Zhang和Kuhn，2013），生殖细胞在这种培养基中不能存活（Chaudhari等人。 ...
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| Acute Live/Dead Assay for the Analysis of Toxic Effects of Drugs on Cultured Neurons
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Author:
Date:
2016-08-05
[Abstract] The primary culture of central nervous system (CNS) neurons is a popular test system for a rapid, quantitative and reliable assessment of the effects of drugs on central neurons. Consequently, studies on the excitotoxicity of NMDA activation and on intracellular calcium handling machineries with respect to ischemic damage to the brain as well as neurodegenerative diseases have been highly productive (Ankarcrona et al., 1995). This created the need to establish a standard method for assessment of neurotoxicity. Several methods are currently being used, including LDH leakage and MTT ...
[摘要] 中枢神经系统（CNS）神经元的主要培养物是用于快速，定量和可靠地评估药物对中枢神经元的影响的流行测试系统。因此，关于NMDA激活和细胞内钙处理机制对脑缺血性损伤以及神经退行性疾病的兴奋性毒性的研究已经很有成效（Ankarcrona等，1995）。这就需要建立一种评估神经毒性的标准方法。目前正在使用几种方法，包括LDH渗漏和MTT测定（Mosmann，1983; Decker和Lohmann-Matthes，1988）。我们使用另一种常见的方法来评估急性细胞死亡，死亡/活体检测（Slepian等，1996）。它提供了暴露于有毒物质后细胞死亡过程的精确时间和浓度评估，在我们的情况下，以前提出用作选择性PKM-zeta拮抗剂的ζ抑制肽（ZIP）（Ling等， 2002; Pastalkova等人，2006; Sadeh等人，2015）。在该测定中，我们用Calcein-AM负载细胞，其在穿透到活神经元中时，从非荧光化合物转化为高度荧光的绿色荧光团。随后，在渗透死细胞的碘化丙啶（PI）和计数红/绿荧光细胞的存在下，我们将神经元暴露于不同浓度的ZIP各种持续时间。这种方法可以让我们检查哪些细胞是活的，暴露在有毒物质之后死亡，以及细胞死亡的时间过程。
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