| Xenopus laevis Oocytes Preparation for in-Cell EPR Spectroscopy
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] One of the most exciting perspectives for studying bio-macromolecules comes from the emerging field of in-cell spectroscopy, which enables to determine the structure and dynamics of bio-macromolecules in the cell. In-cell electron paramagnetic resonance (EPR) spectroscopy in combination with micro-injection of bio-macromolecules into Xenopus laevis oocytes is ideally suited for this purpose. Xenopus laevis oocytes are a commonly used eukaryotic cell model in different fields of biology, such as cell- and development-biology. For in-cell EPR, the bio-macromolecules of ...
[摘要] 研究生物大分子的最令人兴奋的观点之一来自于新兴的细胞内光谱学领域，它能够确定细胞中生物大分子的结构和动力学。细胞内电子顺磁共振（EPR）光谱结合将生物大分子微注射到非洲爪蟾卵母细胞中非常适合于此目的。非洲爪蟾卵母细胞是生物学不同领域常用的真核细胞模型，如细胞和发育生物学。对于细胞内EPR，感兴趣的生物大分子通过定点自旋标记显微注射到非洲爪蟾卵母细胞中。通过Nanoliter注射器将样品溶液填充到薄玻璃毛细管中，然后通过小心地穿刺薄膜将其微注射入非洲爪蟾卵母细胞的黑色动物部分。之后，取决于最终的细胞内EPR实验的种类，将三个或五个显微注射的非洲爪蟾卵母细胞装载到Q波段EPR样品管中，随后进行任选的休克冷冻（用于实验冷冻溶液）并且在期望的温育时间之后测量（在低温或生理温度下）。由于显微注射样品的细胞毒性作用和顺磁性自旋标记在还原性细胞环境中的稳定性，孵育时间受到限制。通过监测细胞形态和减少动力学来量化这两个方面。
【背景】电子顺磁共振（EPR）光谱学是用于表征顺磁系统的选择方法（Atherton，1993; Gerson等人，1994; Jeschke和Schweiger，2001）。反磁性生物大分子可以通过定点自旋标记（SDSL）进行EPR光谱学分析，通常使用氮氧化物作为自旋标记（Hubbell和Altenbach，1994; Feix和Klug，2002; ...
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| Dual-sided Voltage-sensitive Dye Imaging of Leech Ganglia
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] In this protocol, we introduce an effective method for voltage-sensitive dye (VSD) loading and imaging of leech ganglia as used in Tomina and Wagenaar (2017). Dissection and dye loading procedures are the most critical steps toward successful whole-ganglion VSD imaging. The former entails the removal of the sheath that covers neurons in the segmental ganglion of the leech, which is required for successful dye loading. The latter entails gently flowing a new generation VSD, VF2.1(OMe).H, onto both sides of the ganglion simultaneously using a pair of peristaltic pumps. We expect the described ...
[摘要] 在这个协议中，我们介绍了一种有效的方法，用于Tomina和Wagenaar（2017）中使用的电压敏感染料（VSD）加载和水蛭神经节成像。 解剖和染料加载程序是成功完成全神经节VSD成像的关键步骤。 前者需要去除覆盖水蛭节段神经节神经元的鞘，这是成功染料加载所需的。 后者需要使用一对蠕动泵同时轻柔地将新一代VSD VF2.1（OMe）.H流入神经节的两侧。 我们期望所描述的技术广泛地转化为其他薄且相对透明的神经系统中的宽视场VSD成像。
【背景】双面显微镜是一种宽视野荧光成像系统，由一对精确对准的显微镜组成，用于观察来自对面的神经元制剂并且一次显示不同的焦平面（Tomina and Wagenaar，2017）。通过将该光学系统与新一代电压敏感染料（VSD），VoltageFluor（Miller等人，2012; Woodford等人，2015），荧光可以同时从不同深度的神经元捕获编码具有高保真度膜电压的信号。我们将这种泛神经元记录系统应用于药用水蛭的神经系统，我们利用电生理学方法诱发虚构行为并定量控制可识别神经元的膜电位（Tomina and ...
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| Isolation of Rice Stripe Virus Preparation from Viruliferous Small Brown Planthoppers and Mechanic Inoculation on Rice
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2017-11-05
[Abstract] Tenuiviruses can infect the plants of the family Poaceae, and cause serious loss of crops, particularly rice and maize, in South-Eastern Asian countries. Tenuiviruses usually depend on insect vectors for their transmission and cannot be transmitted between plants through wounds or abrasions. Rice stripe virus (RSV), a typical member of tenuiviruses, is efficiently transmitted by the small brown planthopper Laodelphax striatellus in a persistent-propagative manner to cause rice stripe disease. Here we presented a convenient method, the midrib micro-injection, to mechanically ...
[摘要] 细菌病毒可以感染禾本科植物，并在东南亚国家造成严重的作物损失，特别是稻米和玉米。 病毒通常依靠昆虫载体传播，不能通过伤口或擦伤传播。 水稻条纹病毒（RSV）是典型的tenuiviruses的成员，以持续繁殖的方式被小型褐飞虱灰飞虱高效率地传播，导致水稻条纹病。 在这里，我们提出了一种方便的方法，即中微量注射，以机械方式将昆虫来源的RSV接种到水稻叶中，以对水稻植物进行致病性测定。
【背景】除非通过根据不同的实验细节从1％至90％的完全不同的传输速率进行血管穿刺接种（Louie，1995; Hogenhout等人，2008），否则不能将机器接种到植物中。至于RSV，机械传播通常失败或产生低感染率（Ling，1972）。特别地，从病变植物注射RSV粗提物后，传播率仅为6％（Okuyama and Asuyama，1959）。在这项工作中提到的中微注射方法将RSV传播率提高到17％。虽然机械传播RSV的发生率仍远低于昆虫载体传播（53％），但是我们的方法为持续繁殖的植物病毒的机械接种提供了便利的方法。此外，基于这种方法，可以在受感染的植物宿主中更精确地确定持续增殖植物病毒的复制和基因表达，而不受昆虫即接种剂量和昆虫蛋白质的干扰。
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