| Myeloid Progenitor Transformation Assay
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Numerous oncogenes have been identified to cause leukemia. For example, chromosomal translocation generates various fusion genes of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene and a partner gene in leukemia, whose gene products transform primary myeloid progenitors into an immortalized state. To characterize the transforming ability of leukemic oncogenes, researchers in the field have developed an ex vivo murine myeloid transformation assay using retroviral gene transduction and its protocol has been improved over the past 10 years. Here, we provide the detailed procedure for this ...
[摘要] 许多致癌基因已被确定为导致白血病。 例如，染色体易位在白血病中产生混合谱系白血病（MLL ）基因和伴侣基因的各种融合基因，其基因产物将原始骨髓祖细胞转化为永生状态。 为了表征白血病癌基因的转化能力，本领域的研究人员已经利用逆转录病毒基因转导开发了一种离体小鼠骨髓转化试验，其方案在过去的10年中得到了改进。 在这里，我们提供了这个检测的详细程序。
【背景】染色体易位产生多种导致白血病的MLL融合基因（Meyer等人，2017）。野生型混合谱系白血病（MLL）蛋白质起着转录调节剂的作用，其在造血不成熟祖细胞中增强包括同源框（homoxox（Hox））基因在内的一组基因的表达（Jude等。，2007）。在正常造血期间，Hox基因在干/祖细胞部分中表达，但在分化过程中转录下调（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama等人， 2013年）;然而，MLL融合蛋白组成性地上调其靶基因并阻断分化以在离体培养条件下建立永生状态。最近，我们报道了MLL-ENL和MLL-AF10融合蛋白招募AF4以激活转录并且还募集DOT1L复合物以维持相同靶基因的转录以有效地转化造血祖细胞（Okuda等人， ...
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| In vivo Leukemogenesis Model Using Retrovirus Transduction
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Various genetic alterations such as chromosomal translocation cause leukemia. For examples, gene rearrangements of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene generate MLL fusion genes, whose products are potent oncogenic drivers in acute leukemia. To better understand the mechanism of disease onset, several murine leukemia models using retroviral gene transduction, xenograft, or Cre-mediated chromosomal translocation have been developed over the past twenty years. Particularly, a retroviral gene transduction-mediated murine leukemia model has been frequently used in the leukemia ...
[摘要] 各种基因改变如染色体易位导致白血病。 例如，混合谱系白血病（MLL ）基因的基因重排产生MLL 融合基因，其产物是急性白血病中有效的致癌驱动因子。 为了更好地理解疾病发生的机制，过去二十年来已经开发了几种使用逆转录病毒基因转导，异种移植或Cre介导的染色体易位的鼠白血病模型。 特别地，逆转录病毒基因转导介导的鼠白血病模型已经在白血病研究领域中经常使用。 在这里，我们描述这个模型的详细协议。
【背景】基因重排产生混合谱系白血病（MLL ）融合基因，导致高度侵袭性的急性白血病。 MLL重排往往伴随着少量额外的遗传改变和不良的临床结果（Andersson等人，2015）。野生型MLL增强和维持包括同源框（Hox）基因在内的一部分基因的表达，以刺激未成熟祖细胞的扩增（Jude等人，2007年）。在未成熟的祖细胞/干细胞组分中，Hoxa9和emis1的表达最高，但随着细胞分化逐渐下降，并最终在终末分化的细胞组分中减少（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama et al。 ，2013）。 MLL融合蛋白组成性地上调包括Hoxa9和Meis1在内的靶基因的表达，使未成熟的祖细胞永生化，并在体内引起白血病 （Ayton和Cleary，2003; ...
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| A Novel Protocol to Quantitatively Measure the Endocytic Trafficking of Amyloid Precursor Protein (APP) in Polarized Primary Neurons with Sub-cellular Resolution
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Alzheimer’s disease’s established primary trigger is β-amyloid (Aβ) (Mucke and Selkoe, 2012). The amyloid precursor protein (APP) endocytosis is required for Aβ generation at early endosomes (Rajendran and Annaert, 2012). APP retention at endosomes depends on its sorting for degradation in lysosomes (Haass et al., 1992; Morel et al., 2013; Edgar et al., 2015; Ubelmann et al., 2017). The following endocytosis assay has been optimized to assess the amyloid precursor protein (APP) endocytosis and degradation by live murine cortical primary neurons (Ubelmann et ...
[摘要] 阿尔茨海默病确定的主要触发因素是β-淀粉样蛋白（Aβ）（Mucke和Selkoe，2012）。 淀粉样蛋白前体蛋白（APP）内吞作用是在早期内体中产生Aβ所必需的（Rajendran和Annaert，2012）。 内涵体上的APP保留取决于其对溶酶体中的降解的分选（Haass等人，1992; Morel等人，2013; Edgar等人， 2015年; Ubelmann等人，2017年）。 已经优化了以下内吞作用测定法以评估活的小鼠皮层原代神经元的淀粉状蛋白前体蛋白（APP）内吞作用和降解（Ubelmann等人，2017）。
【背景】Aβ42积聚是阿尔茨海默病的主要触发因素。 APP的胞吞作用需要Aβ42代（辜和Squazzo，1994; Grbovic 等人，2003; Cirrito 等人，2008;拉金德伦等人，2008）。已经通过表面蛋白的经典生物素化在脉冲追踪动力学实验中分析了APP的内吞作用（Sannerud等人，2011; Xiao等人，2012; Sullivan等人，2014），在单细胞中通过使用针对APP的N-末端胞外结构域的抗体（Yamazaki等人，1995; Xiao ，2012）。这些研究中的大多数使用非神经元细胞（Yamazaki等人，1996; Lee等人，2008; Sullivan等人， ...
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