| Production of Phenotypically Uniform Human Cerebral Organoids from Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] Recent advances in stem cell technology have allowed researchers to generate 3D cerebral organoids (COs) from human pluripotent stem cells (hPSCs). Indeed, COs have provided an unprecedented opportunity to model the developing human brain in a 3D context, and in turn, are suitable for addressing complex neurological questions by leveraging advancements in genetic engineering, high resolution microscopy, and tissue transcriptomics. However, the use of this model is limited by substantial variations in the overall morphology and cellular composition of organoids derived from the same ...
[摘要] [摘要]在干细胞技术的最新进展已经使研究人员能够产生3D脑类器官由人多能干细胞（（COS）hPSCs ）。事实上，COS提供了一个前所未有的机会，发展人的大脑在3D场景模型，并反过来，适用于通过利用在进步，基因工程，高分辨率显微镜处理复杂的神经系统的问题，并组织转录。然而，在U SE 该模型的模型受到源自同一多能细胞系的类器官的整体形态和细胞组成的实质性变化的限制。为了解决这些限制，我们建立了坚固的，高-通过优化的初始阶段用于生产相一致的COS效率协议胚状体（EB）形成和神经诱导。使用该协议，采购员可以重复地与产生一个均匀的尺寸，形状，以及跨多个批次的细胞组合物。˚F urthermore，类器官的是发展了延长的时间段（3 - 6个月）显示建立的相对成熟的功能，包括电生理学活性的神经元，少突胶质细胞和祖细胞的产生。因此，该平台提供了可用于研究人脑发育和相关疾病的强大实验模型。
图形摘要：
多能干细胞对脑类器官发育的概述
[背景技术]在最新进展在体外从人多能干细胞（衍生3D脑类器官（COS）的发展hPSCs ...
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| Mimicking Angiogenesis in vitro: Three-dimensional Co-culture of Vascular Endothelial Cells and Perivascular Cells in Collagen Type I Gels
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Angiogenesis defines the process of formation of new vascular structures form existing blood vessels, involved during development, repair processes like wound healing but also linked to pathological changes. During angiogenic processes, endothelial cells build a vascular network and recruit perivascular cells to form mature, stable vessels. Endothelial cells and perivascular cells secret and assemble a vascular basement membrane and interact via close cell-cell contacts. To mimic these processes in vitro we have developed a versatile three-dimensional culture system where ...
[摘要] 血管发生定义了形成现有血管的新血管结构的形成过程，涉及发育过程中的修复过程，如伤口愈合，还与病理变化有关。 在血管生成过程中，内皮细胞建立血管网络并招募血管周围细胞以形成成熟稳定的血管。 内皮细胞和血管周围细胞秘密并组装血管基底膜，并通过细胞间接触进行相互作用。 为了体外模拟这些过程，我们开发了一种通用的三维培养系统，其中血管周围细胞（PVC）与胶原I型凝胶中的人脐带血管内皮细胞（HUVEC）共培养。 这种共培养系统可用于通过广泛的分析选项来确定新生血管生成事件期间的生物化学和细胞过程。
【背景】内皮细胞和血管周围细胞之间的协调相互作用对于根据给定组织内的局部需要形成稳定的血管网是非常重要的。多个分子组分有助于相互作用，但仍然很少了解。需要各种生长因子来吸引内皮细胞到低氧浓度的位点，并建立新的血管，然后被血管周围细胞覆盖。两种细胞类型相互作用以分泌特定的细胞外基质并稳定新形成的血管。在过去已经建立了多个测定法来分析二维基质胶底物上的血管细胞相互作用和血管样网络形成，但是这些测定在三维细胞内提供关于血管内血管周围细胞相互作用和血管基底膜形成的初始步骤的信息是有限的维度微环境。此外，缺乏适合于培养实验的良好表征的血管周围细胞。
我们以前分离出具有血管周围特征的细胞，因为它们表达周细胞特异性标记，产生和分泌细胞外基质蛋白并在体内刺激血管生成过程（Brachvogel等，2005和2007）。这些细胞用于与人脐静脉内皮细胞建立共培养系统，并研究三维微环境中两种细胞类型相互作用后新生血管发生的关键步骤（Pitzler等，2016; ...
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| Lentiviral shRNA Screen to Identify Epithelial Integrity Regulating Genes in MCF10A 3D Culture
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] MCF10A 3D culture system provides a reductionist model of glandular mammary epithelium which is widely used to study development of glandular architecture, the role of cell polarity and epithelial integrity in control of epithelial cell functions, and mechanisms of breast cancer. Here we describe how to use shRNA screening approach to identify critical cell pathways that couple epithelial structure to individual cell based responses such as cell cycle exit and apoptosis. These studies will help to interrogate genetic changes critical for early breast tumorigenesis. The protocol describes a ...
[摘要] MCF10A 3D文化系统提供了腺体乳腺上皮的还原剂模型，其广泛用于研究腺体结构的发育，细胞极性和上皮完整性在上皮细胞功能的控制中的作用以及乳腺癌的机制。在这里我们描述如何使用shRNA筛选方法来识别关键细胞通路，夫妇上皮结构到个别细胞的反应，如细胞周期退出和凋亡。这些研究将有助于询问对早期乳腺肿瘤发生至关重要的遗传变化。该协议描述了设计用于靶向上皮完整性的慢病毒shRNA构建体的文库和用于悬浮MCF10A培养物的慢病毒转导的高效方法。此外，提供的协议设置MCF10A 3D文化在Matrigel的形态和细胞反应研究通过结构化照明和共聚焦显微镜分析免疫染色的三维结构。
关键字： 3D文化，MCF10A，shRNA，上皮完整性，免疫荧光染色，3D成像，形态测量分析
[背景] 上皮细胞形成高度组织的组织结构，其提供物理支持和用于协调细胞信号传导的结构化支架。跨上皮结构的这种协调的信号传导对于上皮生物学是基本的;使得上皮细胞在调节器官大小，形状，功能和基于个体细胞的应答中的动态联合作用（Roignot等人，2013; Shamir和Ewald，2014）。上皮信号传导的联合指挥还提供了一种强有力的肿瘤抑制机制，通过将外部和内部有丝分裂信号门控到静止的上皮组织（Partanen等人，2013; Rejon等人 ...
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