| In vitro Measurement of Membrane Attack Complex in RPE Cells
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Initiation of the complement system results in the formation of a multiprotein pore termed the membrane attack complex (MAC, C5b-C9). MAC pores accumulate on a cell surface and can result in cell lysis. The retinal pigment epithelium (RPE) is a single monolayer of pigmented epithelial cells located at the posterior poll of the eye that forms the outer blood retinal barrier. RPE cells are highly polarized with apical microvilli and basolateral contact with Bruch’s membrane. In order to obtain biologically relevant polarized RPE cultures in vitro, RPE cells are seeded onto the apical side ...
[摘要] [摘要]补体系统的启动导致形成称为膜攻击复合物（MAC，C5b-C9）的多蛋白孔。MAC孔积聚在细胞表面，可导致细胞裂解。视网膜色素上皮细胞（RPE）是位于眼那种形式的后轮询色素上皮细胞的单个单层š外血视网膜屏障。RPE细胞高度极化，顶端微绒毛和与Bruch膜的基底外侧接触。为了在体外获得生物学上相关的极化RPE培养物，将RPE细胞接种到Transwell滤膜的顶端，并在低血清培养基中培养4周。MAC形成Ò Ñ据报道，RPE细胞是亚裂解的。通过在血清饥饿24小时后向培养基中引入正常人血清（NHS），可以在体外实现MAC的形成。NHS包含启动补体激活和MAC形成所需的所有血清补体蛋白。我们结合了体外RPE极化和补体激活，以利用共聚焦显微镜在体外可视化MAC形成，从而实现了高分辨率MAC成像。
[背景]补体系统是一种进化保守的先天免疫途径。补体激活存在三种主要的独立但重叠的途径，它们在C3转化酶，经典途径，凝集素途径和替代途径中收敛。在经典途径中，免疫复合物（抗原-抗体复合物）通过C1q亚成分结合C1，然后C1s蛋白酶亚基裂解补体因子C4和C2。这些片段（C4bC2b）形成酶复合物“ ...
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| A Bioreactor Method to Generate High-titer, Genetically Stable, Clinical-isolate Human Cytomegalovirus
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Human cytomegalovirus (HCMV) infection is a major cause of morbidity and mortality in transplant patients and a leading cause of congenital birth defects (Saint Louis, 2016). Vaccination and therapeutic studies often require scalable cell culture production of wild type virus, represented by clinical isolates. Obtaining sufficient stocks of wild-type clinical HCMV is often labor intensive and inefficient due to low yield and genetic loss, presenting a barrier to studies of clinical isolates. Here we report a bioreactor method based on continuous infection, where retinal pigment epithelial ...
[摘要] 人类巨细胞病毒（HCMV）感染是移植患者发病率和死亡率的主要原因，并且是先天性先天缺陷的主要原因（Saint Louis，2016）。接种疫苗和治疗性研究通常需要以临床分离物为代表的野生型病毒的可扩展的细胞培养生产。获得充足的野生型临床HCMV库存往往是劳动密集型的，由于产量低和遗传损失效率低下，对临床分离物的研究构成障碍。在这里，我们报告了一种基于连续感染的生物反应器方法，其中在生物反应器中感染粘附到微载体珠上的视网膜色素上皮（ARPE-19）细胞并用于产生维持关键病毒嗜性因子的遗传完整性的高滴度临床分离株HCMV和病毒基因组。在该生物反应器中，通过定期加入未感染的ARPE-19细胞可以维持末期感染，提供了10 7 -10 -8 pfu / ml浓缩的方便的制备TB40 / E IE2-EYFP库存无需日常细胞传代或胰蛋白酶消化。总的来说，与传统的静态培养板相比，这代表病毒产量增加了100倍的100倍，同时需要90％的处理时间。此外，这种连续的感染环境有可能监测感染动态，并可以实时跟踪病毒的进化。
【背景】先天性巨细胞病毒感染是导致出生缺陷的主要原因，仅在美国，每年的直接成本就高达10亿美元，并代表了全球未得到满足的医疗需求（Bristow等人，2011; Griffiths 2013; Manicklal等人，2013; Saint ...
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