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Date:
2017-11-20
[Abstract] Gelatin embedding of whole brains for sectioning is a critical procedure used in neuroscience to ensure all morphological and spatial details are preserved intact. Here, we describe an inexpensive, reproducible and efficient means to embed post-fixed brains ready for sectioning in gelatin within a week’s time. The sections obtained are distortion-free and their fragile internal structures preserved which can be used for serial reconstructions for lesion studies and mapping of viral expression after stereotaxic injections. In addition, the separation of adjacent slices into a series of 3-4 ...
[摘要] 整个脑切片明胶嵌入是神经科学中使用的关键程序，以确保所有的形态和空间的细节保存完好。 在这里，我们描述了一个廉价，可重复和有效的方法来嵌入后固定的大脑准备切片明胶一个星期的时间。 获得的部分是无畸变的，它们的脆弱内部结构被保留下来，可用于系列重建病变研究和立体定位注射后的病毒表达图谱。 此外，将相邻切片分离成3-4个小瓶系列便于在安装步骤中对连续切片进行组织和组装。
【背景】行为神经科学的最新进展已经允许将视蛋白和抗体靶向毒素引入特定亚群的神经元和大脑区域。这些研究通常需要全脑切片的可视化用于组织学和形态学分析，以通过用于行为验证的立体定位注射（Aoki等，，2015）或引言定位细胞类型特异性抗体靶向毒素诱导的损伤的病毒递送转基因（Aquili等人，2014）。利用狂犬病病毒（Suzuki等人，2012）对神经元回路进行了详细的绘图，并且使用明胶作为包埋剂实现了连续切片的定位调查，所述包埋剂作为组织内和周围的结构基质。明胶浸渍的脑组织提供了加强的支持精致的内部结构，如海马和脑室空间，这是容易损坏免疫组织化学（IHC）处理和随后安装到幻灯片上。嵌入式脑切片在安装时通常也不会变形，并且可以将相邻切片用于连续重建。
凝胶嵌入和IHC处理后的质量取决于几个程序性的细节，这可能是乏味和耗时的。在先前公开的方案中，明胶向脑和心室空间的适当渗透和渗透需要真空烘箱（Griffioen等，1992）。此外，将大脑嵌入小模具中是具有挑战性的，因为大脑具有漂浮的趋势。另外，在连续重构的IHC处理之后识别和定向相邻切片可能是艰巨的。 ...
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