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Author:
Kate Kosmac, Bailey D. Peck, R. Grace Walton, Jyothi Mula, Philip A. Kern, Marcas M. Bamman, Richard A. Dennis, Cale A. Jacobs, Christian Lattermann, Darren L. Johnson and Charlotte A. Peterson,
Date:
2018-06-20
[Abstract] Macrophages have well-characterized roles in skeletal muscle repair and regeneration. Relatively little is known regarding the role of resident macrophages in skeletal muscle homeostasis, extracellular matrix remodeling, growth, metabolism and adaptation to various stimuli including exercise and training. Despite speculation into macrophage contributions during these processes, studies characterizing macrophages in non-injured muscle are limited and methods used to identify macrophages vary. A standardized method for the identification of human resident skeletal muscle macrophages will aide ...
[摘要] 巨噬细胞在骨骼肌修复和再生中具有很好的特征。关于驻留巨噬细胞在骨骼肌动态平衡，细胞外基质重塑，生长，代谢和适应各种刺激（包括运动和训练）中的作用知之甚少。尽管在这些过程中推测了巨噬细胞的贡献，但表征非受伤肌肉中的巨噬细胞的研究是有限的，用于鉴定巨噬细胞的方法各不相同。用于鉴定人类骨骼肌巨噬细胞的标准化方法将有助于鉴定这些免疫细胞，并可用于各研究结果的比较。在这里，我们提出免疫组织化学（IHC）协议，通过流式细胞术验证，以清楚地识别常驻人类骨骼肌巨噬细胞种群。我们显示CD11b和CD206双IHC有效识别人骨骼肌中的巨噬细胞。此外，非受伤人骨骼肌中的大多数巨噬细胞表现出“混合”M1 / M2表型，表达CD11b，CD14，CD68，CD86和CD206。在休息的骨骼肌中存在相对较少的CD11b + / CD206-巨噬细胞群。这种人口的相对丰度的变化可能反映了骨骼肌肉环境的重要变化。肌肉中的CD11b和CD206 IHC也显示出巨噬细胞的不同形态学特征，这些特征可能与这些细胞的功能状态有关。
【背景】巨噬细胞是能够适应局部微环境变化的多向性免疫细胞。在过去几年中，研究表明巨噬细胞表型是动态的，存在于连续统一体中（Mosser and Edwards，2008，Italiani and Boraschi，2014，Martinez and ...
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] The bioluminescence resonance energy transfer (BRET) assay can be used as an indicator of molecular approximation and/or interaction. A significant resonance energy transfer signal is generated when the acceptor, having the appropriate spectral overlap with the donor emission, is approximated with the donor. In the example provided, proteins tagged with bioluminescent Renilla luciferase (Rlu) as donor and yellow fluorescent protein (YFP) as acceptor were co-expressed in cells. This pair of donor and acceptor have an approximate Förster distance of 4.4 nm, providing the optimal ...
[摘要] 生物发光共振能量转移（BRET）测定可以用作分子近似和/或相互作用的指标。 当具有与供体发射的适当光谱重叠的受体与供体近似时，产生显着的共振能量转移信号。 在所提供的例子中，用生物发光的海肾荧光素酶（Rlu）作为供体和作为受体的黄色荧光蛋白（YFP）标记的蛋白在细胞中共表达。 这对供体和受体具有4.4nm的近似Forster距离，提供了最佳的工作距离（Dacres et。，2010）。 这种技术可以用来探索在活细胞中发生的特定分子相互作用的时间过程。
【背景】使用生物发光供体和荧光受体的生物发光共振能量转移（BRET）研究可以监测在活细胞中实时发生的分子相互作用（例如标记的蛋白质，肽或小分子之间）。这种方法取决于供体和受体之间的空间近似，以及适当的光谱重叠以产生有意义的信号（图1）。目前提供的实例使用Rlu-标记的蛋白质作为供体和YFP-标记的蛋白质作为受体（Harikumar等人，2007）。这已被非常成功地应用于建立活细胞质膜中生理相关的蛋白质 - 蛋白质相互作用的存在。然而，重要的是包括可能导致非特异性蛋白质 - 蛋白质近似和能量转移（旁观者效应）的表达水平的对照，例如使用相似水平的已知非相关蛋白质的表达。此外，与未标记蛋白质的竞争可以帮助建立信号的相互作用的可饱和性和特异性。
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