| In-vitro GLP-1 Release Assay Using STC-1 Cells
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] Enteroendocrine cells (EECs) are known chemosensors in the gastrointestinal (GI) epithelium. They release a diversity of gut hormones in response to various stimuli. Here, we report an in-vitro assay to measure GLP-1 release from cultured murine EEC’s under fatty acid stimulation.
[摘要] [摘要] 肠内分泌细胞（EEC）是胃肠道（GI）上皮中的已知化学传感器。它们响应各种刺激而释放多种肠激素。在这里，我们报告了一种体外测定法，以测量在脂肪酸刺激下培养的鼠EEC中GLP-1的释放。
[背景] 肠上皮是人体与环境之间最大的界面。该界面由单个上皮层组成，包含多个具有独特功能角色的不同细胞类型。与LGR5阳性上皮干细胞不同，肠内分泌细胞（EEC）沿整个胃肠道散布在整个上皮中。EEC通过产生和分泌多种激素，在对营养和其他刺激的反应中起关键作用。传统上，这些细胞是按照荷尔蒙特征来分类的（Nausheen 等人，2013； Latorre 等人，2016； Verhoeckx 等人，2015a），尽管随着单细胞RNA测序的到来，我们逐渐意识到这些细胞中的大多数分泌多种激素（Haber 等人，2017; Billing 等人，2019）。EEC的亚型L细胞由胰高血糖素样肽1和2（GLP-1和GLP-2）的产生定义，也可能分泌YY肽（PYY）和胰岛素样肽5（INSL5） 。大多数L细胞见于回肠末端和结肠，而另一些也见于十二指肠和空肠近端。L细胞表面的受体使它们能够直接感知管腔成分并产生适当的激素反应。L细胞上最显着的营养成分和食物成分受体是经典的味觉受体，游离脂肪酸受体以及蛋白质及其产物的受体（Drucker 和Nauck ，2006年；Furness ...
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| Extraction and Quantification of Polyphosphate (polyP) from Gram-negative Bacteria
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Polyphosphate (polyP), a universally conserved biomolecule, is composed of up to 1,000 phosphate monomers linked via phosphoanhydride bonds. Reaching levels in bacteria that are in the high nmoles per mg protein range, polyP plays important roles in biofilm formation and colonization, general stress protection and virulence. Various protocols for the detection of polyP in bacteria have been reported. These methods primarily differ in the ways that polyP is extracted and/or detected. Here, we report an improved method, in which we combine polyP extraction via binding to glassmilk with a very ...
[摘要] 多磷酸盐（polyP）是一种普遍保守的生物分子，由多达1,000个通过磷酸酐键连接的磷酸盐单体组成。 达到每毫克蛋白质高纳摩尔细菌的水平，polyP在生物膜形成和定植，一般应力保护和毒力中起重要作用。 已经报道了用于检测细菌中polyP的各种方案。 这些方法主要在于提取和/或检测polyP的方式不同。 在这里，我们报告了一种改进的方法，其中我们结合polyP提取通过结合到玻璃奶与非常敏感的PolyP激酶/荧光素酶检测系统。 通过使用该程序，我们显着增强了polyP检测的灵敏度，使其可能适用于哺乳动物组织。
【背景】聚磷酸盐（polyP）是一种由多达1,000种无机磷酸盐单体的直链组成的生物聚合物，存在于生命的所有三个领域的细胞中。然而，细菌是唯一已经充分研究了polyP代谢酶的生物。将ATP转化为polyP的细菌polyP激酶（PPK）催化正向和反向反应。虽然polyP的合成显然是细胞中有利的反应，但通过在体外提供足够量的ADP ，该酶可用于从polyP产生ATP，使得基于荧光素酶的ATP检测成为可能（Ault -Riché et al。，1998）。缺乏PPK的细菌在生物膜形成，运动性，持久性和各种应激反应方面存在缺陷，并显示出对次卤酸（即，漂白）应激或磷酸盐饥饿的显着增加的敏感性（图1）（Rao et al。，2009; Gray et ...
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| Retroviral Capsid Core Stability Assay
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Structural stability of the capsid core is a critical parameter for the productive infection of a cell by a retrovirus. Compromised stability can lead to premature core disassembly, exposure of replication intermediates to cytosolic nucleic acid sensors that can trigger innate antiviral responses, and failure to integrate the proviral genome into the host DNA. Thus, core stability is a critical feature of viral replicative fitness. While there are several well-described techniques to assess viral capsid core stability, most are generally time and labor intensive. Recently, our group compared ...
[摘要] 衣壳核心的结构稳定性是逆转录病毒对细胞的生产性感染的关键参数。受损的稳定性可导致核心过早解体，将复制中间体暴露于细胞溶质核酸传感器，其可触发先天的抗病毒反应，并且不能将原病毒基因组整合到宿主DNA中。因此，核心稳定性是病毒复制适应性的关键特征。虽然有几种充分描述的技术来评估病毒衣壳核心稳定性，但大多数通常是时间和劳动密集型的。最近，我们小组使用基于体外洗涤剂的方法结合超速离心法对衣壳测定的流行命运比较了鼠白血病病毒衣壳核心的相对稳定性。我们发现两种方法都得出了类似的结论，尽管第一种方法是比较显示核心稳定性差异的病毒突变体时评估相对衣壳核心稳定性的一种非常简单和快速的方法。
【背景】逆转录病毒已经进化出复制周期，在规避宿主抗病毒反应方面表现优异。逆转录病毒开发的一种策略是将其复制中间体与胞质核酸传感器如cGAS，TREX1，IFI203和DDX41屏蔽起来（Yan et al。，2010; Gao et al。，2013; Lahaye et al。，2013; Stavrou et al。，2015）。在复制过程中，逆转录病毒在细胞质中产生RNA-DNA杂合体和未甲基化的双链前病毒DNA，这是先天免疫传感器的常见靶标（Yan et al。，2010; Gao et al。，2013; Lahaye et ...
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