| Determination of H+-ATPase Activity in Arabidopsis Guard Cell Protoplasts through H+-pumping Measurement and H+-ATPase Quantification
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] The opening of stomata in plants in response to blue light is driven by the plasma membrane H+-ATPase in guard cells. To evaluate the activation of the H+-ATPase in vivo, we can use H+-pumping by guard cells in response to blue light and fusicoccin. To do this, it is required to prepare a large amount of guard cell protoplasts and measure H+-pumping in the protoplasts. It is also necessary to determine the protein amount of H+-ATPase. In this protocol, we describe the procedures required for these preparations and measurements.
[摘要] 响应蓝光的植物气孔的开放是由保卫细胞中的质膜H + -ATPase驱动的。 为了评价体内H + -ATP酶的激活，我们可以使用H + +保卫细胞对蓝光的响应，fusicoccin。 为此，需要制备大量的保卫细胞原生质体，并测量原生质体中的H + - 抽吸。 还需要确定H + -ATP酶的蛋白质量。 在这个协议中，我们描述了这些准备和测量所需的程序。
【背景】响应于蓝光的气孔的开放是由穿过保卫细胞质膜上的H +介导的膜超极化驱动的（Assmann等，1985; Shimazaki等人，1986），并且是由质膜H + -ATP酶引起的（Kinoshita和Shimazaki，1999）。 H + -ATP酶在膜上产生电化学梯度，并提供植物细胞中许多次级运输所需的能量。然而，测量体内H + -ATP酶活性并不容易。利用保卫细胞的蓝光敏感特性，我们的方法可以将体内H +泵送作为体内测量H + + 使用拟南芥保卫细胞原生质体的ATP酶活性（Ueno等人，2005）。与通过蛋白质印迹（Yamauchi等人，2016）的Hβ+ -ATPase定量一起，该方法允许比较Hβ+ -ATPase活性不同的条件或突变背景。
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| Quantification of Trypanosoma cruzi in Tissue and Trypanosoma cruzi Killing Assay
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Infection with Trypanosoma cruzi causes Chagas disease. The methods provided here allow for the quantification of T. cruzi in the liver, heart, and blood of intraperitoneally-infected mice and analysis of the killing activity of the cells infected with T. cruzi in vitro.
[摘要] 感染克氏锥虫（Trypanosoma cruzi）引起恰加斯病（Chagas disease）。 这里提供的方法允许量化T。 克氏锥虫在感染腹腔的小鼠的肝脏，心脏和血液中分析，并分析克氏锥虫在体外感染的细胞的杀伤活性。
【背景】以慢性心肌病为特征的恰加斯病是由细胞内原生动物寄生虫克氏锥虫感染引起的（Bonney等人，2015年）。拉丁美洲大约有2000万人患有南美锥虫病（里贝罗等人，2012; Flavia Nardy等人，2015），已成为全球性的健康问题由于感染者的迁移（Andrade等人，2014; Garcia等人，2015; Requena-Mendez等人）， 2015年）。已经开发了几种药物，如nifurtimox和benznidazole，用于治疗恰加斯病。然而，这些药物需要服用数月，并有严重的副作用（Viotti et al。，2009）。治疗的主要目的是抑制T。克鲁兹通过血液传播以及防止心力衰竭的发展。因此，定量T的协议。 cruzi 和 T。这里介绍的克鲁兹杀螨试验可能有助于发展南美锥虫病的新型诊断方法和治疗策略。
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