| In-vitro and in-planta Botrytis cinerea Inoculation Assays for Tomato
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Botrytis cinerea (B. cinerea) attacks many crops of economic importance, represents one of the most extensively studied necrotrophic pathogens. Inoculation of B. cinerea and phenotypic analysis of plant resistance are key procedures to investigate the mechanism of plant immunity. Here we describe a protocol for B. cinerea inoculation on medium and planta based on our study using the tomato-B. cinerea system.
[摘要] 灰葡萄孢（Botrytis cinerea）（ B. cinerea ）攻击许多经济重要作物，代表了研究最广泛的坏死营养病原体之一。 接种 B。 cinerea 和植物抗性的表型分析是研究植物免疫机制的关键程序。 这里我们描述一个用于 B的协议。 基于我们使用番茄B的研究，在培养基和植物上接种灰霉病菌。 cinerea 系统。
【背景】 B中。在全世界超过200种作物中，包括许多重要的蔬菜和小型水果作物，“灰霉病”导致严重损失。广谱病原体可以感染植物茎，叶，花和果实以产生孢子（Dean等人，2012; van Kan等人，2017），其中喜欢在高湿度下发生（Elad等人，2007年）。产生的孢子对多种宿主构成持久的威胁（Elad et al。，2007）。基于其科学和经济的重要性， B。被评为第二大植物致病真菌（Dean等，2012）。在 B中。 cinerea宿主植物，番茄（Solanum lycopersicum）是一种经济上有价值的物种，也可作为研究植物免疫力的经典模型（Ryan，2000; Sun等人， em>，2011; Rosli和Martin，2015）。为了研究植物对 ...
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| Transient Gene Expression for the Characteristic Signal Sequences and the Estimation of the Localization of Target Protein in Plant Cell
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] We have proposed and tested a method for characterization of the signal sequences and determinations of target protein localization in a plant cell. This method, called the AgI-PrI, implies extraction of protoplasts from plant tissues after agroinfiltration. The suggested approach combines the advantages of two widely used methods for transient gene expression in plants–agroinfiltration and transfection of isolated protoplasts. The AgI-PrI technic can be applied to other plant species.
[摘要] 我们已经提出并测试了用于表征信号序列和确定植物细胞中目标蛋白质定位的方法。 这种称为AgI-PrI的方法意味着在农杆菌浸润后从植物组织中提取原生质体。 所提出的方法结合了两种广泛使用的用于植物中瞬时基因表达的方法的优点 - 农杆菌浸润和转分离的原生质体。 AgI-PrI技术可应用于其他植物物种。
【背景】迄今为止，已经开发并广泛使用以下用于植物中基因瞬时表达的技术：农杆菌渗入，植物外植体的生物射弹和使用聚乙二醇或电穿孔转染原生质体。这些方法的有效性已被清楚地证明。植物中瞬时表达基因的每种策略以及其益处具有其局限性和缺点，例如由于植物表皮细胞的复杂形状（农杆菌浸润）导致的重组报道蛋白在植物细胞区室中的良好成像困难，低转化效率以及专用设备和辅助材料（用于生物弹）的必要性，以及高活性原生质体产量和有效转染所需的复杂准备程序。这是开发和测试用于在植物细胞中瞬时表达基因的新方法的原因，优选通过改进实验方案并保留研究结果的生理意义。由于蛋白质在包括植物在内的活生物体中的细胞定位与它们的功能密切相关，活细胞中蛋白质的良好可视化成为评估蛋白质功能的重要工具。
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| A Novel Protocol to Quantitatively Measure the Endocytic Trafficking of Amyloid Precursor Protein (APP) in Polarized Primary Neurons with Sub-cellular Resolution
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Alzheimer’s disease’s established primary trigger is β-amyloid (Aβ) (Mucke and Selkoe, 2012). The amyloid precursor protein (APP) endocytosis is required for Aβ generation at early endosomes (Rajendran and Annaert, 2012). APP retention at endosomes depends on its sorting for degradation in lysosomes (Haass et al., 1992; Morel et al., 2013; Edgar et al., 2015; Ubelmann et al., 2017). The following endocytosis assay has been optimized to assess the amyloid precursor protein (APP) endocytosis and degradation by live murine cortical primary neurons (Ubelmann et ...
[摘要] 阿尔茨海默病确定的主要触发因素是β-淀粉样蛋白（Aβ）（Mucke和Selkoe，2012）。 淀粉样蛋白前体蛋白（APP）内吞作用是在早期内体中产生Aβ所必需的（Rajendran和Annaert，2012）。 内涵体上的APP保留取决于其对溶酶体中的降解的分选（Haass等人，1992; Morel等人，2013; Edgar等人， 2015年; Ubelmann等人，2017年）。 已经优化了以下内吞作用测定法以评估活的小鼠皮层原代神经元的淀粉状蛋白前体蛋白（APP）内吞作用和降解（Ubelmann等人，2017）。
【背景】Aβ42积聚是阿尔茨海默病的主要触发因素。 APP的胞吞作用需要Aβ42代（辜和Squazzo，1994; Grbovic 等人，2003; Cirrito 等人，2008;拉金德伦等人，2008）。已经通过表面蛋白的经典生物素化在脉冲追踪动力学实验中分析了APP的内吞作用（Sannerud等人，2011; Xiao等人，2012; Sullivan等人，2014），在单细胞中通过使用针对APP的N-末端胞外结构域的抗体（Yamazaki等人，1995; Xiao ，2012）。这些研究中的大多数使用非神经元细胞（Yamazaki等人，1996; Lee等人，2008; Sullivan等人， ...
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