| Intravenous Labeling and Analysis of the Content of Thymic Perivascular Spaces
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Following development in the thymus, T cells are thought to exit into the periphery predominantly through perivascular spaces (PVS). This exit route is used by conventional T cells, and likely also applies to unconventional T cell subsets, such as precursors of CD8αα and TCRγδ intraepithelial lymphocytes, regulatory T cells and natural killer T cells. Additional cell types might also be found in the PVS and initiate interactions with exiting T cells. The exact content of the PVS, and the processes within, are not well studied. To distinguish vascular from resident cells within various tissues ...
[摘要] 在胸腺发育后，T细胞被认为主要通过血管周围间隙（PVS）进入周边。 这种退路由常规T细胞使用，也可能适用于非常规T细胞亚群，例如CD8αα和TCRγδ上皮内淋巴细胞的前体，调节性T细胞和天然杀伤T细胞。 其他细胞类型也可能在PVS中发现并启动与退出T细胞的相互作用。 PVS的确切内容及其内部过程尚未得到充分研究。 为了通过流式细胞术将血管与各种组织中的驻留细胞区分开，静脉内（静脉内）标记正在成为常用方法。 我们最近使用抗CD45.2抗体和磁性富集来进一步评估这种技术，并比较胸腺和血液中的标记和未标记的细胞。 该测定可用于特异性研究胸腺PVS内的造血细胞亚群。
【背景】未成熟的胸腺细胞经历一系列成熟步骤，包括正向和负向选择，其消除了大部分发育中的T细胞。由此产生的成熟T细胞库因此形成朝向更高比例的有益克隆和减少比例的危险自反应克隆。胸腺还产生较少丰富的T细胞亚群，其通常用于维持免疫系统，组织和代谢稳态，包括：TCRγδ细胞，调节性T细胞（Treg），自然杀伤T细胞（NKT），上皮内淋巴细胞（IEL）和粘膜相关不变T（MAIT）细胞。成熟的胸腺细胞准备迁移到外周，上调表达识别鞘氨醇-1磷酸（S1P）的受体（S1PR1）的表达，S1P是血液中高浓度存在的脂质分子。 S1PR1 + T细胞沿着S1P梯度迁移并卷入血管循环中。
胸腺血管周围间隙（PVS）是实质和脉管系统之间的基膜分隔室。它们被认为促进了细胞的运输，特别是从胸腺移出的成熟T细胞（Mori等人，2007; ...
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| Notch Ligand Binding Assay Using Flow Cytometry
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Notch signaling is an evolutionarily conserved signaling pathway that plays an indispensable role during development, and in the maintenance of homeostatic processes, in a wide variety of tissues (Kopan, 2012; Hori et al., 2013). The multifaceted roles of Notch signaling are stringently regulated at different levels. One of the most important aspects of regulation is the binding of different Notch ligands to each Notch receptor (NOTCH1-NOTCH4). Canonical ligands Delta or Serrate (in Drosophila), and Delta-like (DLL1 and DLL4) or Jagged (JAG1 and JAG2) (in mammals), are ...
[摘要] Notch信号传导是进化上保守的信号传导途径，在发育过程中以及在各种组织中维持体内平衡过程中起着不可或缺的作用（Kopan，2012; Hori等人，2013）。 Notch信号的多方面作用在不同的层面上受到严格的调控。监管的最重要的方面之一是不同Notch配体与各Notch受体（NOTCH1-NOTCH4）的结合。典型的配体Delta或Serrate（在果蝇中）和Delta样（DLL1和DLL4）或Jagged（JAG1和JAG2）（在哺乳动物中）是跨膜糖蛋白。在一个细胞上表达的配体结合相邻细胞上的Notch受体以诱导Notch信号传导。通过O-岩藻糖和O-GlcNAc聚糖对Notch受体细胞外结构域的糖基化作为Notch信号强度的关键调节剂已经得到很好的确立（Stanley and Okajima，2010; Haltom and Jafar-Nejad，2015; Sawaguchi et al。 >，2017）。为了表征Notch配体与分离细胞中的Notch受体的结合，我们利用人Fc区在C端标记的Notch配体胞外结构域，并通过流式细胞术确定荧光抗Fc抗体的结合。
【背景】众所周知，细胞增殖，分化和凋亡受Notch信号调节。 ...
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