| Mouse Mammary Gland Whole Mount Preparation and Analysis
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] The mammary gland undergoes extensive remodeling during pregnancy and is also subject to neoplastic processes both of which result in histological changes of the gland epithelial structure. Since the mammary tree is a complex three-dimensional structure a method is needed that provides an overview of the entire gland. Whole mounts provide this information, are inexpensive and do not require specialized equipment. This protocol describes mammary gland isolation, whole mount preparation and analysis. Mammary gland tissue, which is removed postmortem, is stained with Carmine Alum, a nuclear ...
[摘要] 乳腺在怀孕期间经历广泛的重塑并且还经历肿瘤过程，这两者都导致腺体上皮结构的组织学变化。 由于乳树是复杂的三维结构，因此需要一种提供整个腺体概览的方法。 整个安装提供这些信息，价格低廉，不需要专门的设备。 该协议描述了乳腺分离，整体制备和分析。 在死后取出的乳腺组织用胭脂红明矾（一种核染色剂）染色，允许检测嵌入乳腺脂肪垫的脂肪组织中的上皮结构。 通过光学显微镜对染色的乳腺进行成像或嵌入并切片以进行组织学检查。 诸如Image J的图像分析软件可用于量化分支复杂性，上皮结构重塑或增生变化的扩展。
【背景】尽管乳腺的发育在胚胎发育期间开始并且在出生时存在基本的上皮结构，但是上皮乳树在出生后经历广泛的扩张。响应于激素变化，乳腺上皮细胞增殖并侵入乳腺脂肪垫。在怀孕期间，乳腺上皮经历进一步的分化和重塑以准备产奶。随后，这些上皮结构对断奶作出反应。这些重塑过程由激素，生长因子，细胞因子和细胞外基质驱动。除了响应生理过程的重塑之外，乳腺还经历诸如肿瘤转化的病理过程。这种复杂的生物学以及相对容易的分离使得乳腺成为有用的实验模型。分析乳腺生物学或肿瘤转化的实验研究通常使用小鼠模型来量化基因缺失或过表达对乳腺发育，重塑和肿瘤转化的影响。乳腺整个坐骑允许对乳腺的整个3D上皮结构进行常规和疾病过程的常规检查（Plante et al。，2011; Inman et al。， ...
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| Immunohistochemical Identification of Human Skeletal Muscle Macrophages
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Author:
Kate Kosmac, Bailey D. Peck, R. Grace Walton, Jyothi Mula, Philip A. Kern, Marcas M. Bamman, Richard A. Dennis, Cale A. Jacobs, Christian Lattermann, Darren L. Johnson and Charlotte A. Peterson,
Date:
2018-06-20
[Abstract] Macrophages have well-characterized roles in skeletal muscle repair and regeneration. Relatively little is known regarding the role of resident macrophages in skeletal muscle homeostasis, extracellular matrix remodeling, growth, metabolism and adaptation to various stimuli including exercise and training. Despite speculation into macrophage contributions during these processes, studies characterizing macrophages in non-injured muscle are limited and methods used to identify macrophages vary. A standardized method for the identification of human resident skeletal muscle macrophages will aide ...
[摘要] 巨噬细胞在骨骼肌修复和再生中具有很好的特征。关于驻留巨噬细胞在骨骼肌动态平衡，细胞外基质重塑，生长，代谢和适应各种刺激（包括运动和训练）中的作用知之甚少。尽管在这些过程中推测了巨噬细胞的贡献，但表征非受伤肌肉中的巨噬细胞的研究是有限的，用于鉴定巨噬细胞的方法各不相同。用于鉴定人类骨骼肌巨噬细胞的标准化方法将有助于鉴定这些免疫细胞，并可用于各研究结果的比较。在这里，我们提出免疫组织化学（IHC）协议，通过流式细胞术验证，以清楚地识别常驻人类骨骼肌巨噬细胞种群。我们显示CD11b和CD206双IHC有效识别人骨骼肌中的巨噬细胞。此外，非受伤人骨骼肌中的大多数巨噬细胞表现出“混合”M1 / M2表型，表达CD11b，CD14，CD68，CD86和CD206。在休息的骨骼肌中存在相对较少的CD11b + / CD206-巨噬细胞群。这种人口的相对丰度的变化可能反映了骨骼肌肉环境的重要变化。肌肉中的CD11b和CD206 IHC也显示出巨噬细胞的不同形态学特征，这些特征可能与这些细胞的功能状态有关。
【背景】巨噬细胞是能够适应局部微环境变化的多向性免疫细胞。在过去几年中，研究表明巨噬细胞表型是动态的，存在于连续统一体中（Mosser and Edwards，2008，Italiani and Boraschi，2014，Martinez and ...
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| FACS-based Isolation of Neural and Glioma Stem Cell Populations from Fresh Human Tissues Utilizing EGF Ligand
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Direct isolation of human neural and glioma stem cells from fresh tissues permits their biological study without prior culture and may capture novel aspects of their molecular phenotype in their native state. Recently, we demonstrated the ability to prospectively isolate stem cell populations from fresh human germinal matrix and glioblastoma samples, exploiting the ability of cells to bind the Epidermal Growth Factor (EGF) ligand in fluorescence-activated cell sorting (FACS). We demonstrated that FACS-isolated EGF-bound neural and glioblastoma populations encompass the sphere-forming colonies in ...
[摘要] 从新鲜组织中直接分离人类神经和胶质瘤干细胞允许其在没有事先培养的情况下进行生物学研究，并且可以在其天然状态中捕获其分子表型的新方面。最近，我们展示了前瞻性地从新鲜人类生发基质和胶质母细胞瘤样品中分离干细胞群的能力，利用细胞在荧光激活细胞分选（FACS）中结合表皮生长因子（EGF）配体的能力。我们证明FACS分离的EGF结合的神经和成胶质细胞瘤细胞群体在体外包含球体形成的集落，并且能够自我更新和多向分化。在此我们详细描述了具有来自新鲜死亡和手术组织的干细胞特性的EGF-结合（即EGFR +）人类神经和胶质瘤细胞的纯化方法。利用天然配体结合能力前瞻性分离干细胞群的能力为了解非培养条件下的正常和肿瘤细胞生物学打开了新的门，并且适用于在种群和单细胞分辨率下的各种下游分子测序研究。
【背景】由于缺乏通用的神经和神经胶质瘤干细胞标志物（Lathia et al。，2015）以及频繁依赖于培养的细胞，理解人神经和胶质瘤干细胞的内在生物学一直是一个挑战比那些直接从组织分离的。跨膜糖蛋白Prominin或CD133是分离神经（Uchida等，2000）和神经胶质瘤干细胞（GSC）（Singh等，2000）的最好描述和经常使用的干细胞标记物之一。等人，2003; Singh等人，2004; ...
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