| Measurement of Dopamine Using Fast Scan Cyclic Voltammetry in Rodent Brain Slices
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Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Fast scan cyclic voltammetry (FSCV) is an electrochemical technique that allows sub-second detection of oxidizable chemical species, including monoamine neurotransmitters such as dopamine, norepinephrine, and serotonin. This technique has been used to record the physiological dynamics of these neurotransmitters in brain tissue, including their rates of release and reuptake as well as the activity of neuromodulators that regulate such processes. This protocol will focus on the use of ex vivo FSCV for the detection of dopamine within the nucleus accumbens in slices obtained from ...
[摘要] 快速扫描循环伏安法（FSCV）是一种电化学技术，可以亚秒检测可氧化的化学物质，包括单胺类神经递质，如多巴胺，去甲肾上腺素和血清素。 该技术已被用于记录这些神经递质在脑组织中的生理动态，包括它们的释放和再摄取速率以及调节这些过程的神经调节剂的活性。 该方案将集中于使用离体 FSCV检测从啮齿动物获得的切片中的伏隔核内的多巴胺。 我们已经包含了所有必要的材料，试剂，配方，程序和分析，以便在实验室环境中成功地执行该技术。 此外，我们还提供了一些警示点，我们认为这些警告点对于那些在该领域的新手有帮助。
【背景】由于首先将用于检查生理系统的电特性的能力用于临床前科学研究，因此已经开发了许多用于研究突触生理学的技术。从鱿鱼轴突电生理记录的早期到现在的快速扫描循环伏安法（FSCV）在人类帕金森病患者中进行（Kishida et al。，2016; Lohrenz et al。，2016），该领域在相对较短的时间内取得了重大进展。该协议的重点是FSCV，是物理学家，分析化学家和神经科学家之间40多年的创新和合作的技术成果。早在19世纪（Bard和Zoski，2000年），电化学与Michael Faraday和Alessandro Volta一起诞生（Bard and Zoski，2000），直到20世纪20年代，Jaroslav ...
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| Brain Tissue Culture of Per2::Luciferase Transgenic Mice for ex vivo Bioluminescence
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] In circadian research, it is essential to be able to track a biological rhythm for several days with the minimum perturbation for the organisms or tissues. The use of transgenic mice lines, in which the luciferase reporter is coupled to a molecular clock protein (here PERIOD2), gives us the opportunity to follow the circadian activity in different tissues or even single clock cells for days without manipulation. This method creates sections using a mouse brain matrix, which allows us to obtain several brain samples quickly at a single time point.
[摘要] 在昼夜节律研究中，能够以最小的生物或组织扰动跟踪生物节律数天是至关重要的。 使用转基因小鼠系，其中荧光素酶报告基因与分子钟蛋白（此处为PERIOD2）偶联，使我们有机会在不经操作的情况下跟踪不同组织或甚至单个时钟细胞中的昼夜节律活动数天。 该方法使用鼠标脑矩阵创建切片，这允许我们在单个时间点快速获得几个脑样本。
【背景】昼夜节律是大约24小时循环的行为或分子变化，并且在没有任何外部线索的情况下持续。在哺乳动物中，运动活动，体温和激素释放是昼夜节律的实例，其在位于下丘脑的视交叉上核（SCN）时钟的控制下。 SCN细胞保持内源性节律的能力是由于时钟基因表达的正负循环组成的分子机制：首先，CLOCK和BMAL1蛋白异二聚化通过E-box位点激活不同基因的转录关于基因如 period （ Per1-3 ）和隐花色素（ Cry1-2 ; Takahashi）的启动子 et al。，2008）。然后，PERIOD和CRYPTOCHROME的蛋白质异二聚化并返回到细胞核以防止BMAL1与E-Box结合。因此，PERIOD和CRYPTOCHROME抑制其自身的转录（Takahashi et al。，2008）。第二个环由类视黄醇相关的孤儿受体（ROR）和Rev-Erb组成：ROR蛋白激活 Bmal1 基因，而REV-ERB蛋白抑制它通过 ROR反应 Bmal1 ...
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| Assessing Rates of Long-distance Carbon Transport in Arabidopsis by Collecting Phloem Exudations into EDTA Solutions after Photosynthetic Labeling with [14C]CO2
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Phloem loading and transport of photoassimilate from photoautotrophic source leaves to heterotrophic sink organs are essential physiological processes that help the disparate organs of a plant function as a single, unified organism. We present three protocols we routinely use in combination with each other to assess (1) the relative rates of sucrose (Suc) loading into the phloem vascular system of mature leaves (Yadav et al., 2017a), (2) the relative rates of carbon loading and transport through the phloem (this protocol), and (3) the relative rates of carbon unloading into ...
[摘要] 来自光合自养源的光合同化物的韧皮部装载和运输到异养宿主器官是必不可少的生理过程，其帮助植物的不同器官作为单一的统一生物体起作用。我们提出了三种方案，我们经常使用它们相互结合来评估（1）蔗糖（Suc）加载到成熟叶片的韧皮部血管系统中的相对比率（Yadav等人，2017a）， （2）通过韧皮部的碳载量和转运的相对速率（本方案）;（3）长距离运输后碳向异养池器官，特别是根部卸载的相对速率（Yadav等，我们建议，在实验和对照植物上进行所有三种方案提供了全植物碳分配的可靠比较，并将与单独进行的单个方案相关的模糊度最小化（Dasgupta等人， 2014年;卡迪尔卡尔等人，2016年）。在该方案中，在源叶中光致同化[14C] CO 2 2-，并且通过将韧皮部流出物收集到EDTA溶液中，随后进行闪烁计数来量化光合同化物的韧皮部负载和转运。
【背景】通过韧皮部将光合自养源组织中的还原碳和其他化合物分配到异养池组织是影响植物生长和产量的关键生理过程。由于这一核心作用，有兴趣从植物生物学的许多领域分析和量化韧皮部含量。然而，收集真正的韧皮部汁液是困难的，因为易位流一般在高静水压力下，而且筛分元件具有快速的自密封机制以防止损坏时的损失。几种收集技术已经出现，但目前还没有一种方法或一组方法提供了一个完整的，无伪象的易位韧皮部液位测量方法。在这里，我们简要描述替代技术，然后详细描述我们的方法，收集韧皮部分泌物到含有低浓度乙二胺四乙酸（EDTA）的溶液中，然后用[14 ...
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